原创精品课件：1.1微生物的分离和培养（Ⅱ）.ppt

1．配制：计算、称量、熔化 2．调节pH：　用3%的HCI/NaOH调节pH 7．0--- 7．2 3．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在 管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 4．包扎： 操作步骤: 5．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 6．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 7．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 倒平板: 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 注意: 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿 盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生 物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 选择培养基 加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞 纯化大肠杆菌: 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落. 微生物的接种技术 三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） * * 1.1 微生物的分离和培养（Ⅱ） 微生物 包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 特点：结构都相当简单,多数个体十分微小(o.1mm)的生物的总称。 通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 原核 原生生物界 真菌界 病毒界 真核 病毒 SARS病毒 禽流感病毒 朊病毒（蛋白质病毒） 真菌 如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构 酵母菌和霉菌 青霉 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、课题目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。 无菌技术的操作。 二、课题重点和难点： 三、技能目标： （2）按培养基的物理形态分： 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 一 基础知识: （3）按培养基的功能分： P12 基础培养基 选择培养基 鉴别培养基 （1）按培养基的化学成分分： ·天然培养基 ·合成培养基 ·半合成培养基 阅读课本P8第三段分别说出它们的优点、缺点。 各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？ 答：不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质。 注： 另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 阅读P8---P9说出消毒和灭菌有何不同？ 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 …… (1)常用消毒的方法： 二 无菌技术： 1、灼烧灭菌: 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-