名校联盟山东省新泰市第二中学2011-2012学年生物 1.2 基因工程的基本操作程序（课件）.ppt

基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序 获得目的基因的方法 1. 从基因文库中获取目的基因 获得目的基因的方法 PCR技术 原理： 前提： 过程： 　　用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 　基因操作的基本步骤 三、将目的基因导入受体细胞——转化 将目的基因导入各类细胞的方法 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 农杆菌转化法 你能说说农杆菌转化法的大概过程吗？ 根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？ 如果想将一个抗病基因导入单子叶植物，理论上你认为该怎么做？ 显微注射技术 将目的基因导入微生物细胞 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素。若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 　基因操作的基本步骤 四、目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 检测目的基因是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质 作业 1. 课本15页“思考与探究”第4题 2. 11页“寻根问底” * 1.目的基因的获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 　　目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 　基因操作的基本步骤 一、提取目的基因—— 将需要的基因从供体生物　的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 什么是基因文库？ 什么是部分基因文库？ 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 目的基因的有关信息与什么相联系？ 2.人工合成基因法——PCR扩增技术 PCR (polymerase chain reaction) ——聚合酶链式反应 是一项再生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。 PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 目的基因DNA受热变性，解链； 引物与单链互补结合； 合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 　基因操作的基本步骤 目的： 所需物质： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 启动子 终止子 标记基因 复制原点 目 的 基 因 表达载体 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 用人工的方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。 将目的基因导入受体细胞并使之扩增 导入 扩增 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞吸收DNA分子 导入贮藏蛋白基因的超级羊和超级小鼠 分子杂交技术 1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 2) 有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 *