名校联盟湖南省安仁一中生物必修三《12 基因工程的基本操作程序》课件.ppt

检测目的基因是否翻译成蛋白质 　　具体做法是：　　第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；　　第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；　　第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；　　第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；　　第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。　　由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精） 显微注射 受精卵 新性状动物 将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 1、基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是( ) A．结构简单，操作方便 B．繁殖速度快 C．遗传物质含量少、简单 D．性状稳定,变异少 B 目的基因的表达和检测 接种实验 抗原－抗体杂交法 DNA-RNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 DNA分子杂交 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 A- A- 32P T- T- C- G- T- -G 32P -T -T -A -A -C -A X1 C- C- A- G- T- T- A- X2 -G -G -T -C -A -A -T Y1 A- A- T- T- C- G- T- Y1 -T -T -A -A -G -C -A 探针 待测DNAX 待测DNAY 待测DNAY与探针DNA相同 检测目的基因是否导入受体细胞 目的DNA片段 检测目的基因是否转录出了mRNA 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 目的基因 蛋白质 小鼠体内 抗体 目的基因 受体细胞 蛋白质 抗原 抗原 杂交分子 检测目的基因是否翻译成蛋白质 ----抗原抗体杂交 ---抗原-抗体杂交 * * * 现代生物科技专题 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 基因工程的基本操作程序 基因工程的目的基因－－ 　　主要是指编码蛋白质的结构基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 2、从基因文库中获取 (基因序列未知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库－－如：cDNA文库 目的基因的获取 限制酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 1)基因组文库(Genomic library) 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。 cDNA( 互补DNA)： 是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 2)cDNA文库 (cDNA library) 反转录酶 mRNA 基因重组 cDNA 图书馆 国家图书馆 市图书馆 基因文库 基因组文库 部分基因文库 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 从基因文库中得到目的基因的方法 2、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应 目的基因的获取 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 5/ 3/