2018年海南省文昌市同课异构---《DNA的粗提取与鉴定》课件共28张PPT.ppt

自主学习（实验思路） 1、DNA从哪提取？（用什么方法破碎细胞而DNA不受破坏） 2、怎样将DNA与细胞中的其他生物大分子分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 阅读课本54页，思考： 提取生物大分子的基本思路是什么？ DNA主要与哪些生物大分子分离？ 方法1：根据DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，提取DNA 结合图，思考回答课本的问题 1、DNA在0.14 mol／L NaCl溶液中溶解度最低而蛋白质此时的溶解度最高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到初提取的滤出物DNA。 2、利用DNA不溶于酒精，细胞中的某些蛋白质可溶于酒精的特点，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 3、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 4、大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性（蛋白质变性后溶解度降低而产生沉淀） 5、洗涤剂能够瓦解细胞膜（脂质），但对DNA没有影响（在植物材料中提取DNA使用） （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液(DNA释放和溶解） 此步为实验成功以否的关键 1、破碎动物细胞的方法—— 2、破碎植物细胞的方法—— 去除滤液中的杂质小结（方案一） 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ） A .防止凝血 B. 加快DNA析出 C .加快DNA溶解 D.加速凝血 2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ） A . 2mol/l B. 0.1mol/l C . 0.14mol/l D. 0.015mol/l 3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A .加快DNA溶解的速度 B. 加快溶解杂质的速度 C .减小DNA的溶解度，加快DNA析出 D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出 8、DNA遇二苯胺会染成（沸水浴） A 硅红色 B 红色 C 紫色 D 蓝色 * 讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 在NaCl溶液浓度小于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 当NaCl的物质的量浓度为2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 （二）检验原理： 1、DNA遇二苯胺（沸水浴）呈蓝色 2、甲基绿与DNA结合，呈绿色 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 阅读55页的实验材料 材料：新鲜的鸡血 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 ①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 渗透吸水胀破 洗涤剂+食盐搅拌研磨 ？ ？ 不充分？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 研磨不充分——使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 （三）去除滤液中的杂质（DNA的纯化） 阅读课本55页的三个方案 下面以鸡血为实验材料粗提取DNA并鉴定 DNA的实验过程，请观察并总结实验步骤 新鲜的鸡血 鸡血细胞 离心 1、获取实验材料 柠檬酸钠溶液 ？ 用吸管除去离心管上部的澄清液 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液（DNA的释放） 鸡血细胞 足量的蒸馏水 玻璃棒一个方向 快速充分搅拌 细胞破裂 一层纱布过滤（1） 含染色质的滤液 3、去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物 （DNA的纯化） 染色质滤液 2mol/LNaCl溶液 玻璃棒一个方向搅拌 析出DNA黏稠物 DNA溶解