枝江大曲酒窖泥微生物群落结构与多样性分析-微生物学专业论文.docx

华中农业大学2016届硕士研究生毕业论文2．2．4DGGE主条带切胶回收202．2．5DGGE主条带测序202．2．6窖泥基因组DNA高通量测序。202．2．7窖泥可培养细菌的分离鉴定．213结果与分析233．1窖泥基因组DNA提取。233．2窖泥细菌PCR-DGGE检测。233．3窖泥真菌PCR-DGGE检测。273．4窖泥细菌高通量测序303．4．1高通量测序分析窖泥细菌群落多样性303．4．2高通量测序分析窖泥细菌群落组成．313．4．3高通量测序分析窖泥细菌群落波动情况363．5窖泥真菌高通量测序383．5．1高通量测序分析窖泥真菌群落多样性383．5．2高通量测序分析窖泥真菌群落组成．393．6窖泥可培养细菌分离鉴定423．6．1窖泥好氧性细菌分离鉴定．423．6．2窖泥兼性厌氧细菌分离鉴定．433．6．3窖泥厌氧性细菌分离鉴定．454讨{念．．474．1小结474．2不同窖龄窖泥的细菌群落结构比较474．3不同窖龄窖泥的真菌群落结构比较504．4窖泥可培养细菌的分离情况514．5课题展望．52参考文献54致{射．61II万方数据枝江大曲酒窖泥微生物群落结构与多样性分析摘要枝江大曲酒属于浓香型白酒，其特点是采用泥窖发酵。泥窖窖泥中含有丰富的微生物群落，它们在白酒发酵过程中代谢产生的多种代谢产物，如酶类、酸类、醇类和脂类化合物，可促进白酒风味物质的形成，对白酒品质有重要影响。因此，探究窖泥微生物群落组成及多样性，可为浓香型枝江大曲酒的实际生产和工艺改进提供理论依据。本课题以10、20、30年枝江大曲酒窖泥为研究对象，结合PCR-DGGE和高通量测序对三种窖泥的细菌和真菌群落进行分析，探究不同窖龄窖泥细菌和真菌群落结构，同时采用传统培养方法，分离窖泥中的可培养细菌，以期揭示枝江窖泥的功能菌群。PCR．DGGE和高通量测序结果表明，枝江大曲酒窖泥细菌主要归属于厚壁菌f-J(Firmicutes)、互养菌f-](Synergistetes)和拟杆菌f-](Bacteroidetes)Z个菌门；10、20、30年窖泥共有优势菌属为Clostridium 1V和喜热菌属(Caloramator)，其丰度随窖龄增加呈上升趋势：Syntrophaceticus、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、Sedimentibacter、理研菌属(Petrimonas)和乳杆菌属(Lactobacillus)的丰度随窖龄的增加而下降；Aminobacterium为20、30年窖泥特有优势菌属；枝江窖泥真菌主要分布于子囊菌门(Aseomycota)、担子菌门(Basidiomycota)和接合菌门(Zygomycota)；10、20、30年窖泥共有优势真菌为假丝酵母属(Candidasp．)、扣囊复膜酵母(Saccharomycopsisfibuligera)、热子囊菌属(Thermoascuscrustaceus)和散囊菌属(Eurotiumsp．)；根霉属(Rhizopussp．)、散囊菌属(Eurotiumsp．)、异常威克汉姆酵母(Wickerhamomycesanomalus)和热子囊菌属(Thermoascussp．)的丰度随窖龄增加而上升；丝孢酵母属(Trichosporonsp．)和无壳散囊菌(Eurotiumathecium)为10年窖泥特有优势菌属；20年窖泥的细菌群落多样性最高，而真菌群落多样性则是30年窖泥最高。通过传统培养方法分别从枝江大曲酒窖泥中分离出高温放线菌科(Thermoactinomycetaceae)、葡萄球菌属(Staph)，lococcus sp．)、坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)等11株好氧性细菌，耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、花域芽孢杆万方数据华中农业大学2016届硕士研究生毕业论文菌(Bacillusvallismortis)等6株兼性厌氧性细菌，以及包括酪丁酸梭菌(Clostridiumtyrobutyricum)、梭状芽孢杆菌(Clostridiumsp．)、氨基戊酸梭菌(Clostridiumaminovalericum)、扭曲真杆菌(Eubacteriumcontortum)和丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)在内的5株厌氧性细菌。关键词：窖泥；PCR-DGGE；高通量测序；传统培养；细菌群落；真菌群落万方数据枝江大曲酒窖泥微生物群落结构与多样性分析AbstractZhijiangfiquorisatypeofLuzhou-flavorliquor,fermentedinapitthatcontain