一种哺乳动物性腺特异表达基因的克隆及组织细胞定位的初步研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 一种哺乳动物性腺特异表达基因的克隆 一种哺乳动物性腺特异表达基因的克隆 及组织细胞定位的初步研究 摘要 本论文旨在研究一种哺乳动物性腺特异表达基因一GSE (Gonad—Specific Expression Gene，GSE)和其在睾丸组织中的定位。论文共分 为两部分：第一部分为文献综述部分；第二部分包括第二章和第三章，为 试验研究部分。 第二章的研究目的是通过对广西本地水牛GSE基因及3’端序列进行克 隆和分析，为进一步研究水牛GSE基因的功能打下基础。根据小鼠GSE基 因以及GeneBank中与小鼠GSE基因相似的其它哺乳动物的相似基因进行 分析，设计一对扩增水牛GSE基因保守区序列的引物。然后以成年水牛睾 丸总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出长度为396 bp的水牛GSE基 因保守区序列。扩增产物经纯化后，连接至pMDl8．T载体上进行测序。结 果显示，该片段与小鼠GSE基因的覆盖区同源性为76％。再根据所得到 的这段已知序列设计一条上游引物，通过3’RACE的方法扩增水牛GSE基 因的3’端序列，结果得到42_bp的3’非编码区。将该片段与先前扩增得 到的序列拼接后得到了一段长度为700 bp的片段，这也是目前得到的水牛 GSE基因的最长片段。应用Scansite蛋白质磷酸化预测软件对得到的水牛 GSE蛋白进行分析发现，水牛GSE基因所编码的多肽链中含有一个具有 SH2结构域的Shc蛋白的结构(VKLSPGQYELLPPPV)，同时还含有一个蛋 SH2结构域的 SH2结构域的Shc蛋白的结构(VKLSPGQYELLPPPV)，同时还含有一个蛋 白激酶C的p亚型(PKC．p)结构(PPPVPKQASRSFVFRSTVQRFP)。这些结 构说明，GSE蛋白很可能在磷酸化和去磷酸化方面具有生物活性。 第三章的研究目的是通过组织原位杂交的方法，确定水牛GSE基因在 睾丸中确切的表达部位，从而进一步了解该基因在配子发生中的作用。用 扩增得到的水牛GSE基因序列作为模板，制备用于组织原位杂交的地高辛 标记的cDNA探针，并经过效率检测和斑点杂交检测后确定可用于组织原 位杂交。最后，将制备好cDNA探针与成年水牛睾丸石蜡切片进行组织原 位杂交，结果发现，在成年水牛睾丸曲细精管的基底室出现了杂交信号， 近腔端和曲细精管的管腔中几乎无杂交信号。通过与睾丸曲细精管上皮的 细胞组成相结合进行分析发现，水牛GSE基因应该是在初级精母细胞中大 量表达的。由于初级精母细胞正处于减数分裂时期，在这些细胞中有GSE 基因的表达，说明该基因很可能与减数分裂有关。 关键词：水牛GSE基因3’RACE探针组织原位杂交 II PRIⅣD刺 PRIⅣD刺STUDY ON CLONING AND SUBCELLULAR LOCALIZATIoN OF ONEⅪND OF M蝴MAI。IAN GONAD SPECIFIC EXPRESSION GENE This thesis studies issues related to a kind of mammalian gonad specific expression gene——GSE gene(Gonad-Specific Expression Gene)and it’S subcellular localization in testis．It contains two parts：part I is review the literatures；part II includes chapter II and chapter HI，which are experimental works． The objective of this study in chapter 11 was to clone and analyze the GuangXi native buffalo GSE gene and its 3’cDNA end,which lay the foundations for further studies on the functions of buffalo GSE gene．A pair of primers for amplifying the conserved fragment of the buffalo GSE gene was designed according to the mouse GSE gene and other species similar genes from GeneBank．Thell the total RNA which was extracted from adult buffalo testis