线粒体融合蛋白2在肝细胞肝癌中的作用机制的研究-外科学（普外）专业论文.docx

浙江大学博士学位论文致谢致谢值此论文完成之际，向所有帮助过我的老师和同学致以深深的谢意! 时光荏苒，转眼间四年的博士研究生生活即将结束，仍清晰的记得硕士期间昆明医学院谭晶教授及中国科学院昆明动物研究所分子免疫实验室张华堂教授对 我的关怀，是你们的鼓励，才让我迈出了考博这一步。感谢浙江大学，郑树林院士国际化的视野，严谨勤奋的治学风格，从容、乐 观、豁达、以身立行的做人风格，不仅使我明白了如何看待事物，懂得了如何规 划自己的人生，而且还明白了许多待人接物与为人处世的道理，深刻影响着我今后的工作和生活；感谢我的导师王伟林教授，感谢您在四年来对我学习上的谆谆教诲，以及生 活上无微不至的悉心关怀。本课题从选题、设计以及论文的撰写无不倾注着您的 心血。您严谨务实的工作科研作风、孜孜不倦的治学态度，以及一切为患者着想 的高尚医德给了我很深的启迪和影响，使我四年来受益匪浅，更是我终生学习的 楷模。在此，请让我向您表示衷心的感谢并致以崇高的敬意。感谢实验室周琳老师、谢海洋等老师对我实验的指导与帮助，在实验以及论文撰写方面对我的无私帮助； 感谢所有师兄弟，科研、生活终日相伴、无微关心；感谢305舍友在学习生活中给我的关心和帮助，四年的宿舍生活及我们的兄 弟情意我铭记在心；天涯不过，你我胸怀。四年的学习生活，有很多帮助过我的老师、同学和朋友，在这里无法一一提 及，我谨向他们一并表示我最衷心的感谢和祝福!最后感谢在家乡一直默默付出的父母和亲人，是你们的无私奉献及鼓励，才 得以让我顺利完成学业，是你们给了我最深的爱和期望；虽然不常回家，但是我 很想家!万方数据浙江大学博士学位论文中文摘要线粒体融合蛋白2在肝细胞肝癌中作用 机制的研究浙江大学医学院外科学(普外) 博士研究生周小虎导师王伟林教授中文摘要目前，肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是我国最常见的恶性肿 瘤疾病，占我国恶性肿瘤死亡原因的第二位，肝癌早期往往不易发现，导致多数 患者不能接受手术治疗，仍缺乏有效的治疗方法。肿瘤的形成多与过度活化的细胞增殖以及受抑制的细胞凋亡相关。目前的研究热点及针对肝癌的治疗方法也主 要是通过各种手段抑制肿瘤细胞的异常增殖、促进癌细胞凋亡。细胞增殖抑制基 因(hyperplasia suppressor gene，HSG)是利用差异显示技术得到的一个与高血压相 关的新基因，可以抑制血管平滑肌细胞的增殖、促进其凋亡，并在后续研究中发 现HSG蛋白也参与调节线粒体融合，因此也被称为线粒体融合蛋白2(MFN2)。 随着研究的深入，进一步发现MFN2跟很多肿瘤的恶性生物学特征相关，提示 MFN2可能与肿瘤发生发展密切相关；同时，也有部分研究发现，MFN2可以促进 癌细胞凋亡，因此也逐渐成为肿瘤研究的热点。II万方数据浙江大学博士学位论文中文摘要第一部分MicroRNA．761在肝癌中低表达并通过抑制线粒体融 合蛋白2表达影响肝癌细胞生长目的：线粒体融合蛋白2(mitofusin-2，MFN2)是锚定在线粒体外膜的调节蛋白，是 线粒体融合蛋白家族的重要成员，负责调节相邻线粒体外膜的融合，对维持线粒 体分裂、融合的平衡以及线粒体的稳态起到重要作用。越来越多的研究显示，MFN2 可能为一个新的抑癌基因，并且在恶性肿瘤的发生、发展中起到重要的作用。MFN2 在多个肿瘤中低表达的原因，以及是否受到miRNAs的调节，并没有被阐明。本 实验旨在阐明肝癌细胞中MFN2的转录后调节机制。方法：通过网站(target scan)预测分析得到MFN2基因的潜在miRNA--miRNA．761， 运用荧光素酶双报告实验确认能其能直接调节MFN2基因；通过qRT-PCR分析其在肝癌组织中的表达量，以及其表达量与MFN2表达量的关系。外源性导入miRNA．mimic和inhibitor，分析其对肝癌细胞增殖、细胞凋亡、线粒体膜电位、 活性氧水平以及细胞侵袭迁移的影响；构建裸鼠原位肝癌移植模型，阐明miRNA 在体内对肝癌细胞增殖和转移的作用。结果：MiRNA一761可以直接作用于MFN2的3-UTR区，并可在mRNA和蛋白水平 调节其表达；MiRNA．761在肝癌组织中低表达，并且表达量与MFN2呈负相关性； MiRNA．761抑制剂可以降低线粒体膜电位，促进细胞凋亡，并在体内外抑制肝癌 细胞的增殖和转移。III万方数据浙江大学博士学位论文中文摘要结论：MiRNA一761抑制剂可以通过上调MFN2的表达，损伤线粒体功能，从而导致 肝癌细胞增殖受到抑制，并促进肝癌细胞凋亡。【关键字】线粒体融合蛋白2；、线粒体；、肝癌；、MiR-761；，细胞增殖IV万方数据浙江大学博士学位论文中文摘要第Z-部分线粒体融合蛋白2表达相关基因神经导航分子3与肝 癌预后的相关性分析目的：