一个拟南芥镉敏感基因的克隆及功能研究-生物工程专业论文.docx

合肥工业大学本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合合肥工业大学工程硕士学位论文质量要求。答辩委员会签名(工作单位、职称、姓名)：卿教掣博导安徽大学委员：教授／博导合肥工业大学剖趴置赧顾跗肥耻姆手长军教授，硕导合肥工业大学彩乡≯副教授／硕导合肥工业大学导师：合肥工业大学万方数据学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行独立研究工作所取得的成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得合肥工业太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文成果做出贡献的个人和集体，本人已在论文中作了明确的说明，并表示谢意。学位论文中表达的观点纯属作者本人观点，与合肥工业大学无关。学位敝作者繇帚曩覆签名日期：加f6年午月／7Et学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解合肥工业太堂有关保留、使用学位论文的规定，即：除必威体育官网网址期内的涉密学位论文外，学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子光盘，允许论文被查阅或借阅。本人授权金目巴王些太堂可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，允许采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：帚毳慑指导教师签名：签名日期：莎田if-午月fc7日签名日期．叫6年牛月f7日论文作者毕业去向工作单位：联系电话：E．mail：通讯地妇}=：邮政编码：万方数据致谢光阴似箭，岁月如棱。虽然在我们的人生旅途中三年的时间是那么的短暂，然而这三年却是我们一生中不可抹灭的最为青春绚烂的三年。在经历了找工作的各种坎坷之后，让我更加体会到了写论文时的那份宁静与思考。回首这三年来的求学历程，我衷心的对那些曾经引导我、激励和帮助我的人表示感谢。首先要感谢我的导师曹树青教授，无论在平时实验上的指导还是从论文的选题到最终写作定稿，都倾注了曹老师大量的心血，给了我细一tb的指导和无私的帮助。在我攻读硕士研究生的三年里，我的自学能力在这里得到了提升，赋予了我最有意义的收获，带领我走进了知识的殿堂，不但使我丰富了知识，还教会我珍惜友谊和时间。我从曹老师那里领略到了真正的学术精神，曹老师严谨的治学态度和坚韧的探索精神使我终生受益。感谢阳立波老师和樊婷婷老师，在这三年里对我的指导和帮助，他们教会了我很多。正是因为有了他们，我才能在各方面不断取得进步，在此我向他们表示由衷的谢谢，同时祝所有的老师们在今后培养出更多的优秀人才，桃李满天下。同时，非常感谢董万春师兄和韩娇师姐以及实验室的师弟和师妹们，感谢他们三年来的陪伴和帮助。最后特别需要感谢的是我的父母。父母对我的的养育之恩无以为报，他们一直是我求学路上的坚强后盾，当我面临困难和迷茫之际，总会为我排忧解难，他们对我的爱和支持是我不断前进的动力。最后，非常感谢在百忙之中抽空审阅此论文的老师以及各位答辩老师。作者：管灵霞2016年4月1日万方数据摘要土壤污染重金属镉通过作物吸收进入食物链累积到人体器官与组织中，对人类健康构成严重威胁。植物修复基因工程技术是土壤重金属镉污染修复行之有效的方法之一，而其关键在于对植物耐受镉毒害分子机制的认识及其调控其积累的关键基因发掘。本研究利用正向遗传学途径从拟南芥T-DNA插入突变体库中筛选获得一个镉胁迫敏感cdml突变体(c_a,Ll_mium．sensitivem__utant1)。本论文研究主要结果如下：1．利用Tail．PCR技术，对cdml突变体中的突变基因进行克隆，发现在该突变体中一个T-DNA插入在PTR3基因的启动子区域(位于起始密码子前384bp)，导致该基因表达降低。生物信息学分析表明，该基因编码一个协助转运蛋白，为协助转运蛋白超家族MFS(MajorFacilitatorSuperfamily)成员。2．在CdCl2胁迫条件下，与野生型相比，cdml突变体表现对镉胁迫敏感。表明PTR3基因在调控重金属镉胁迫响应中具有重要作用。3．以野生型拟南芥的cDNA为模板扩增出PTR3基因全长，将该基因全长连接到pBll21载体上，构建获得PTR3过表达载体。将构建好的重组载体转至农杆菌GV3101，通过花序侵染法将PTR3重组载体转化到拟南芥野生型植株中，最终通过转基因筛选以及遗传鉴定获得PTR3过表达转基因植株。4．在CdCl2胁迫条件下，与野生型相比，PTR3过表达株系表现对镉胁迫耐受。表明PTR3基因正调控镉胁迫响应。5．进一步分析镉胁迫应答相关基因的表达，发现cdml突变体和PTR3过表达株系在重金属镉胁迫处理后PDR8、GSHl、僦、GRl、G艘、P傩J『、P艘、ABCCl、ABa∞等基因的转录水平较野生型差异显著，而ATM3、ACBP．『基因的转录水平无显著变化，表明PTR3基因可能