调节xist基因转录因子的分析-生物化学与分子生物学专业论文.docx

摘要摘要哺乳动物X染色体连锁基因表达上的剂量差异，是通过雌性胚胎发育早期一条X染色体的失活(xChromosomeInactivition,XCI)来平衡的。XCI包括印记型失活和随机型失活两种形式，其过程很复杂，包括启动、计数、选择、失活、维持等一系列的步骤。X染色体失活中心(XInactivitonCenteT,XIC)是XCI 的调控开关，包含许多与XCI有关的基因元件，重要的是Xist和乃讶。Xist和Tsix对X染色体失活的调控是通过RNA来起作用的。它们都转录非编码的KNA。XistRNA覆盖在X染色体上，抑制该染色体上基因的表达，失活整条x染色体。TsLxRNA则抑制XistRNA的转录，维持X染色体的活性。这些顺式元件的调控作用是与相关转录因子的反式作用密切相关的。目前的研究发现转录调控因子如Ctcf．Yyl、Oct4、Sox2、Nanog可结合到Xist和Tsix的的一些位点，调控它们的表达，从而间接影响XCI。调控XCI的转录因子研究还不深入，转录调控机制以及新的转录因子的发现逐渐被受关注。研究发现在Xist的启动子区、第一个内含子区和乃觑的启动子区存在着很多DNAseI超敏感位点(DHS)，这些位点是转录因子调节的重要区域。课题就是从Xist的这些DNAseI超敏感位点出发，采用凝胶迁移(EMSA)、亲和纯化、质谱分析的实验方法在体外探寻新的调节Xist的重要转录因子，并在体内进一步研究其功能。这将对阐述X染色体的失活机制有重要作用，为X染色体失活紊乱相关疾病的治疗奠定理论基础。关键词：X染色体失活Xist转录因子EMSAAbstractAbstractInmammals，equaldosageofX-linkedgenesbetweenthesexesisachievedbyXchromosomeinactivation(xci)inearlyembryonicdevelopmentoffemales．XCIcontainstwotypes：imprintedX-inactivationandrandomX-inactivation．Itisacomplexprocessincludinginitiation,counting，choice，inactivationandmaintenance．Xinactivationcenter(YdC)isthemastercontrollocusoftheXCI．ItcontainsmanyXCIrelatedcisgenedements，themostimportantisXistand乃及．Xistand乃觑regulateXCIbyRNA．TheytranscribenoncodingRNArespectively．XistRNAoverlayonthefuturinactiveXchromosome，represstheexpressionofgene，resultingintheinactivationofXchromosome．Inversely,TsixRNAsrepressthetranscriptionofXistRNAandmaintaintheactivestateofXchromosome．Theregulatoryroleofciselementsisrelatedtothetransactionoftranscriptionfactors．ThecurrentstudyhavefoundthatsometranscriptionfactorssuchasCtcf,Yyl，Oct4，Sox2andNanogcanbindtospecificsitesofXistandTs／x,andregulatetheirexpression，indirectlyaffectXCI．Thetranscription factorswhichregulateXCIhavenotbeenstudyeddeeply．Moreandmoreresearchersbegintopayattetiontotranscriptionregulationmechanismandnewtranscriptionfactor．PreviousstudiesshowedthatclusteredDNAseIhypersensitivesites(DHS)locatedatthepromoterandthefirstintronofXist．alsothepromoterof乃觑．RegulatoryelementstendtooccuratoraroundDHS．TheprojectisbasedontheseDHSofXist．EMSA，DNAaffinitypurif