小鼠escs在体外向pgclcs定向诱导及其在体内的卵巢再生研究-动物学专业论文.docx

相应基因表达、相应蛋白质表达，说明ESCs在诱导过程中不仅维持了细胞的干细胞特异性，而且得到的ESCs、EpiLCs、PGCLCs是下一步实验所理想的细胞材料。(2)12．5d雌性小鼠生殖腺细胞单独，及其分别与ESCs、EpiLCs、PGCLCs三种细胞组合进行的卵巢再生实验中，卵巢样组织回收率分别为：67％(16／24)、75％(18／24)、0％(0／24)、100％(24／24)，PGCLCs组卵巢样组织回收率最高。(3)在由ESCs和PGCLCs与12．5d雌性小鼠生殖腺细胞组合形成的卵巢再生实验中，均可观察到正常卵巢结构并检测到表达红色荧光的供体细胞，表明ESCs和PGCLCs移植到体内后参与或促进了卵巢的再生；类似的，在EpiLCs与12．5d雌性小鼠生殖腺细胞组合形成的非卵巢结构移植体中也检测到了表达红色荧光的标记细胞，但是目前并没有观察到正常的卵巢结构，我们推测EpiLCs对于卵巢再生具有一定的抑制作用。终上所述，本研究所用的ESCs在体外条件下可以定向诱导形成EpiLCs和PGCLCs，而且这三种不同类型的细胞ESCs、EpiLC、PGCLCs与12．5d雌性小鼠生殖腺细胞聚合后分别可以在再生移植体中检测到标记细胞，但是对卵巢再生的影响差异极大，其中PGCLCs组的卵巢样组织再生效率最高，相关机制需要进一步探讨。关键词：4、鼠，ESCs，EpiLCs，PGCLCs，定向诱导，卵巢再生万方数据内蒙古大学硕士学位论文THESTUDYoNDIRECTEDFORMATIoNOFPRIMORDIALGERM．LIKECELLSjⅣ玢豫DFROMMOUSEEMBRYoNICSTEMCELLSANDTHEYMEDIATEDOV枷ANREGENERATIONJⅣ多7加ABSTRACTTheoccurrenceofcellsingenitalsystemhasbecomeoneofthehottopicsintheresearchoflifescience．However,thespecifictimeandlocationduringtheoccurrenceandspecializationofgermcellsstilltumouttobedifficultiestodevelopmentalbiologyinmammal．Embryonicstemcells(ESCs)aretotipotentstemcells，whichhavedemonstratedtheabilityofdifferentiateintothreegermlayersbothinvivoandinvitro，andformreproductivechimericmice，thusindicatingthepossibilityofembryonicstemcellstodifferentiateintooocytes．Primordialgermcells，derivedfromembryonicepiblast，aretheprimordialcellsofmammaliangermcells．—I—thasprovedthatESCscanbeESCscouldbeinducedintoprimordialgermcell—likecells(PGCLCs)／nvitro，andfurtherintospermswiththeabilityoffertilization．Butthereisnoreportthatovacanbeobtainedviacombinationofdirecteddifferetiationinvitro andneo—ovaryin vivo．Inthisstudy,Oct4一GFPESCswereusedasthebasicexperimentalcells，andweretransactedwithmCherryforcelltracking．TheESCsweredirectedinducedintoEpiblast--likecellsandpromordialgerm·-likecells／nvitrobysmallmoleculeIII万方数据内蒙古大学硕士学位论文compoundsActivinA、bFGF、BMP4、BMP8a，SCFandEGF．Afterthat?ESCs、EpiLCsandPGCLCsexpressingmCherrywereaggregatedwithfemalemousegermlinecellsfortwodays，thentransplantedintotheovaryECMframetreatedwithsodiumdodecylsulfate(SDS)，fur