运用蛋白质组学的方法研究乙肝表面抗原持续表达对宿主细胞的影响-化学生物学专业论文.docx

复 旦 大 学 博 士 学 位 论 文疾 病 发 生 发 展 中 的 作 用 提 供 了 前 期 实 验 数 据 。第 五 章 发 展 了 一 种 基 于 磁 性 纳 米 材 料 的 快 速 高 效 的 细 胞 质 膜 富 集 技 术 。质 膜 是 细 胞 与 外 界 环 境 隔 离 的 屏 障 ，发 挥 重 要 的 生 物 学 功 能 ，例 如 细 胞 识 别 ，信 号 传 导 ，物 质 运 输 等 。质 膜 蛋 白 质 占 到 人 类 基 因 组 表 达 蛋 白 质 的 30 % ，70 % 以 上 药 物 作 用 靶 点 都 是 质 膜 蛋 白质 。但 是 由 于 质 膜 的 理 化 特 性 ，使 得 质 膜 的 纯 化 鉴 定 一 直是 难 点 也 是 该 领 域 的 研 究 热 点 。传 统 的 质 膜 纯 化 鉴 定 方 法 一 般 都 存 在 着 价 格 昂 贵 ， 步 骤 繁 琐 ，操 作 周 期 较 长 等 局 限 。 由 于 质 膜 区 别 于 其 它 的 细 胞 器 ，特 异 性 地 呈 电负 性 ， 所 以我 们 巧 妙 地 将 带 正 电 的 一N H 4+连 接 在 磁 性 纳 米 材 料 的 表 面 ， 从 而 可 以 高 效 快 速 地 完 成 对 质 膜 的 富 集 ，全 程 只 需 30 分 钟 。后 续 使 用 S D S 一P A G E 电 泳 进 行 一 维 分 离 ， 切 胶 酶 解 ， 再 进 行 H P L C 一E SI一M S 液 质 联 用 分 析 。 共 鉴 定 了 4 89 个 蛋 白质 ，经 生 物 信 息 学 分 析 定 位 在 质 膜 上 的 蛋 白 质 占 5 0 % 以 上 ，从 特 异 性 和 鉴 定 的 质 膜 蛋 白质 的 数 量 上 都 证 明 此 技 术 路 线 是 非 常 有 效 的 。 通 过 此 方 法 鉴 定 到 了 29 个 R A S 家 族 成 员 和 一 些 可 能 的 H B v 在 肝 细 胞 表 面 上 的 受 体 ， 进 一 步 证 实 了 此 技 术 路 线 在 挖 掘 质 膜 上 药 物 靶 标 的 可 行 性 。复 旦 大 学 博 士 学 位 论 文A b s t r a c tT h e 一n a in c o n trib 一ltio n s o f th is d is se r ta tio 一1 a re : a s e rie s o f stu d ie s f oc u s o n tlleH B s A g S ta b ly e x P re s s in g c e ll lin e h a v e b e e n e o n d Lle te d . T h e d if fe r en tia l P ro te o n l icP ro f ile o f H B sA g sta b ly e x P re ss in g e e ll lin e a n d its e o n tro l w a s a n a ly se d . A ln o n g th e 8 1 d if fe re n tia lly e x P I·e s se d P r‘o te in s，th e re w e 一e 50 一n e P ro te in s re la te d to a P o P to s isre g u la tio n : a n d th e n a u to a n tib o d y P 一o f ile w a s b t一ilt t一P u s in g se ro lo g ie a l P ro te o m iere s e a re h a n d Z D E /M A L D I M S . T h e d a ta P ro v id e d a n e w f ie ld f o r th e P a th o g e n e s is o fH B sA g . G ly e o s y la tio n 15 a P o sttra n s la tio n a l 一n o d if ie a tio n o f m a n y Se c r ete d P 一‘o te in s， w h ie h w a s a n in d ie a tio n f o 一liv e r d ise a s e . T h