新型β-磷酸三钙复合物修复sd大鼠颅骨缺损的实验研究-外科学专业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 硕士学位论文 硕士学位论文 思路。其中较为常用的细胞因子包括骨形态发生蛋白(Bm)及血小板衍生生 长因子(PDGF)，BMP一2是转化生长因子一[3(transforming growth factor-[3，TGF-D) 超家族一类的多功能生长因子，其具有促进成骨及促进成骨细胞分化的功能，并 表达特异性的成骨细胞产物。而PDGF．BB是人体内重要的促有丝分裂因子之一， 能促进成骨细胞的生长，骨折局部由于机械损伤产生大量PDGF，促使骨原细胞 转化为成骨细胞，从而促进骨折的愈合。 不同的细胞因子对骨生物材料的成骨成血管效果的影响尚存在争议。因此， 加强骨生物材料的基础研究，构建载细胞活性因子的新型生物功能化骨生物材 料，观察其在体内骨组织修复中的作用效果，同时了解其在体内的降解速度、 骨传导及骨诱导性能，不仅对提高骨生物材料的认识具有相当的科学意义，也 可为临床骨缺损的治疗提供全新的治疗思路和技术方法。 研究目的 本研究所使用的骨髓间充质干细胞来源于SD大鼠，分离后进行体外培养扩 增，与B．TCP材料支架共培养并成骨诱导分化，观察材料对SD大鼠BMSCs增殖 及成骨分化的影响。此外，[3-TCP搭载BMP．2／PDGF．BB构建组织工程骨修复SD 大鼠颅骨标准骨缺损，观察D．磷酸三钙复合材料在骨组织再生修复应用的效果， 为骨生物材料的基础研究，成骨及成血管提供实验资料和科学依据。 研究方法 1．SD大鼠骨髓间充质干细胞在p猢三钙复合材料中的增殖及成骨分化 材料使用新型[3-TCP复合物(CaP五的mGEM21)，材料预制成直径3．6mm， 厚度1．Smm的圆盘形支架，采取双侧股骨、胫骨骨髓，用密度梯度离心法分离 并扩增BMSCs，第三代BMSCs做流式细胞学检测表面标记物，后将第三代 BMSCs与[3-TCP支架于24孔培养板共培养，每个[3-TCP支架种植细胞数31 05 个，添加成骨诱导培养液(含100riM地塞米松，10mM[3．磷酸甘油，0．05raM抗 III 万方数据 摘要坏血酸和 摘要 坏血酸和10nM维生素D3)对BMSCs进行成骨诱导分化21天，对照组采用同 样方法将BMSCs种植于材料，使用普通培养液培养。第1、4、7、14、21天 根据实验计划需要进行电镜扫描，Live／Dead染色法对细胞生长活性进行检测， 观察成骨组及对照组BMSCs增殖。pNpp定量法对碱性磷酸酶(ALP)活性进 行检测，通过实时逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定其骨钙素(OC)， I型骨胶原(C01．I)，碱性磷酸酶(ALP)及RunX．2成骨基因的表达结果。 茜素红染色法对在材料支架进行染色并定量成骨过程形成的矿化物，观察 BMSCs在材料支架上的成骨诱导分化。 2．载骨形态发生蛋白-21jfn小板衍生生长因子-BB的p朔三钙复合材料 用于修复SD大鼠颅骨标准骨缺损的实验研究 材料使用复合了骨形态发生蛋白．2(Bone Morphogenetic Protein，BMP．2) 或血小板衍生生长因子．BB(Platelet Derived Growth Factor-BB，PDGF．BB)的 B．磷酸三钙材料Calcium Phosphate from Growth．factor Enhanced Matrix 2 1 (CaP舶mGEM21)，每组材料搭载BMP．2／PDGF．BB中的一种，BMP．2(浓度 为10ng／100ng)／PDGF—BB(浓度为0．3ug／3ug)，另设置单纯材料组、空白组各 1组，共6组实验组：(1)CaPfromGEM21；(2)CaPfromGEM21+10ng BMP．2： (3)CaPfromGEM21+100ng BMP-2：(4)CaPfromGEM21+0．3ug PDGF·BB； (5)CaPfromGEM21+3ug PDGF．BB；(6)空白组。实验动物为健康的SPF级 3月龄雄性Sprague-Dawley大鼠，3％戊巴比妥钠腹腔灌注麻醉动物，用环钻于 顶骨两侧制作两个直径为3．6mm的全层圆形骨缺损，两侧缺损随机植入两组不 同的实验材料，术后6周处死动物并取出标本进行检测，标本检测方法包括： X线、Micro CT，苏木素．伊红染色(HE染色)及相关的定量分析。 研究结果 体外扩增可见大鼠间充质干细胞生长旺盛，呈长梭形、旋涡状或麦浪状细 胞集落成，流式细胞学检测提示采集的细胞符合骨髓间充质干细胞表面标记特 IV 万方数据 硕士学位论文点。大体观察可见间充质干细胞在支架上生长增殖活跃，电镜扫描图片可以观 硕士学位论文 点。大体观察可见间充质干细胞在支架上生长增殖活跃，电镜扫描图片可以观 察到BMSCs在13-TCP支架