油菜bnsgs3基因对植物生长发育及抗病性的影响-植物病理学专业论文.docx

研究生优秀毕业论文油菜BnSGS3基因对植物生长发育及抗病性的影响目录摘要。iAbstract． ．．．．．ii第一章文献综述一1l油菜主要病毒的研究现状．11．1芜菁花叶病毒．11．2黄瓜花叶病毒．21．3油菜花叶病毒．22植物抗病毒病的分子机制研究32．1植物对病毒的天然抗性。32．2病原物介导的抗性．42．3基因沉默现象．．42．3．1转录后水平的基因沉默42．3．2基因沉默抑制因子73植物中的SGS基因83．1 SGS3基因的抗病毒研究．83．2 SGS3基因的结构特点94转基因拟南芥研究概况94．1拟南芥遗传转化方法的发展104．2转基因拟南芥的筛选-．．l 15、基因沉默与生长发育l l6、本研究的目的与意义12第二章不同油菜品种中BnSGS3的拷贝数测定131材料与方法一1 31．1试验材料l 31．1．1植物材料131．1．2主要试剂141．1．3主要耗材及仪器设备141．2试验方法141．2．1油菜基因组DNA的大量提取．141．2．2 Southern blot杂交探针设计．．1 51．2．3 PCR扩增得到待标记的杂交探针151．2．4 Southern blot探针标记一1 61．2．5标记探针效率检测161．2．6基因组DNA的限制性内切酶酶解和电泳分离．171．2．7 DNA转膜与固定(虹吸印记法)181．2．8 Southem blot杂交．191．2．9免疫检测192结果与分析一202．1探针标记效率检测分析202．2 Southern blot鉴定．203结论与讨论．．22第三章BnSGS3基因遗传转化拟南芥及转基因植株病毒接种鉴定．23万方数据华中农业大学2015届硕士研究生学位(毕业)论文1材料与方法．．231．1材料一231．1．1植物及毒源材料231．1．2质粒．231．1．3农杆菌菌株．231．1．4主要试剂．241．2方法。241．2．1农杆菌感受态的制备．241．2．2质粒转化农杆菌．241．2．3农杆菌阳性转化子PCR检测。251．2．4拟南芥遗传转化251．2．5除草剂筛选T0代转基因拟南芥．261．2．6转基因拟南芥基因组DNA提取．261．2．8拟南芥人工接种病毒方法261．2．9病害调查271．2．10数据统计～272结果与分析一282．1阳性农杆菌转化子的PCR检测分析．282．3农杆菌转化拟南芥分析282．4转基因拟南芥筛选分析292．5转基因拟南芥PCR检测．302．6转基因拟南芥人工接种病毒分析303结论与讨论33第四章BnSGS3基因对植物生长发育和抗病性的影响．341材料与方法一341．1材料．．341．2方法。341．21不同类型拟南芥植株生长差异对比341．2．2油菜BnSGS3．SI转基因植株真菌接种试验351．2．2．1菌种制备．351．2．2．2离体叶片真菌接种方法．351．2．2．3活体接种真菌方法．352结果与分析。362．1不同处理拟南芥植株生长差异对比分析一362．2油菜勘．粥∞．SI转基因植株真菌接种试验分析一373结论与讨论。4l参考文献。42至定谢．46II万方数据油菜BnSGS3基因对植物生长发育及抗病性的影响摘要基因沉默是一种天然的抗病毒机制，Suppressor ofgene silencin93(SGS3)基因 编码的产物是介导植物Post-transcriptional gene silencing(PTGS)过程的核心蛋白， 拟南芥AtSGS3和番茄SISGS3基因具有天然的抗病毒功能。本研实验室得到了一条 油菜BnSGS3基因：通过Southem blot检测得到了不同油菜品种中BnSGS3的拷贝 数；将BnSGS3过表达载体和干扰表达载体通过农杆菌介导法转化到Columbia野生 型拟南芥中，并对其进行病毒抗性鉴定；通过调查转基因拟南芥不同生长时期的改 变，以及对油菜BnSGS3干扰表达的转基因油菜接种核盘菌、灰霉菌进行抗性鉴定， 明确此基因的改变是否影响了植物的生长发育。研究主要结果如下：1、S outhern blot检测的中双六号和苏油一号油菜植株中BnSGS3拷贝数都为1 个单拷贝；BnSGS3过表达和干扰表达的转基因油菜单株中外源基因分别表现出不 同的拷贝数，但最高不超过3，最低为1。2、农杆菌转化拟南芥通过除草剂筛选和PCR鉴定，得到BnSGS3过表达和干 扰表达的转基因拟南芥阳性植株T0代各3 O株；转基因和非转基因拟南芥病毒接种 试验中，过表达BnSGS3的转基因拟南芥只对CMV表现出了抗性；干扰表达BnSGS3 的转基因拟南芥的抗病性与野生型没有差异。3、BnSGS3转化的拟南芥植株和油菜植株在表型上与正常植株有很大的差异， 转基因植株苗期瘦弱，叶片呈现无规律性疯长，相较于非转基因植株叶片颜色更浅，