异源强毒株hn基因替换对嵌合体新城疫rlasota病毒致病力影响的研究-基础兽医学专业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 摘 要 新城疫(Newcast 1 e di sease，ND)是危害世界养禽业的重大烈性传染 病。由新城疫病毒(Newcastl e di sease virus，NDV)引起，NDV为单股 负链RNA病毒，属于副黏病毒科(Paramyxoviri dae)、禽副黏病毒属 (Avulaviru S)。NDV基因组全长l 5kb，其基因组编码的蛋白包括核蛋白 (nucl eoprote i n．NP)，磷蛋白(phosphoprotein，P)，基质蛋白(matri X propel n，M)，融合蛋白(fus ion prote i ns，F)，血凝素一神经氨酸酶蛋白 (hemagglut i ni n—neurami ni dase，HN)和大聚合酶蛋白(RNA—dependent RNA polymerase or 1arge polymerase，L)六个独立转录编码单元。 人们对新城疫病毒致病性的研究主要集中在F蛋白和HN蛋白的致病力 上，认为F蛋白的裂解位点的氨基酸序列是新城疫病毒致病性的主要决定 因素。NDV的HN蛋白是一个多功能蛋白，NDV的HN基因在病毒的感染过程 中扮演着重要角色，但是HN基因对致病性的确切作用还不十分明确。HN 蛋白具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种活性。识别细胞表面的唾液酸 的受体并促进F蛋白的融合作用。因此，HN蛋白在病毒的感染过程中扮演 着重要的角色。 本研究在成功重组新城疫Lasota的基础上，利用反向遗传操作技术， 将强毒株F48E9、HB38的HN基因替换rLasota的HN基因。提取F48E9、 HB38基因组RNA，利用引物经RT-PCR获得其HN基因的PCR产物。连接 pBl uscript II KS(+／-)载体多克隆位点上，测序正确后，利用特定的Mun I和Spe I酶切位点酶切得HN基因片段。构建全长质粒，进行转染，收获 病毒rL—F48E9HN、rL-HB38HN。拯救病毒rL-F48E9HN、rL-HB38HN的F3代， 收获病毒阳性尿囊液提取病毒基因组RNA，进行RT—PCR及序列分析。 嵌合病毒rL-F48E9HN、rL-HB38HN在鸡胚内的生长特性与亲本株 Lasota一致，与F48E9、HB38的生长特性相差甚远。通过分析是否HN蛋 白的来源对于NDV的生物学活性有一定的影响，以及亲本毒株及嵌合病毒 红细胞吸附性和融合作用。结果表明：嵌合病毒红细胞吸附性明显增强， rL-F48E9HN、rL—HB38HN分别增加51％、62％，而融合作用无明显变化。 嵌合病毒对鸡及鸡胚的致病性研究表明：rL-F48E9HN、rL-HB38HN的MDT 分别为l 48h、1 20h，ICPl分别为0．43、0．64；IVPI均为0。说明嵌合病 毒rL-F48E9HN、rL-HB38HN的致病指标有微弱的增强，但是并没有达到 强毒力水平，仍属于弱毒株。结果也表明NDV的致病性是多基因作用的结 果，F 果，F蛋白的裂解位点并不是NDV毒力的唯一决定因素。 关键词：新城疫病毒；血凝素一神经氨酸酶：LaSota疫苗株；反向遗传： F48E9；HB38 Evaluation Evaluation of Newcastle disease virus chimeras expressing the Hemagglutinin-Neuraminidase protein of velogenic strains in the context of a lentogenic recombinant．rLaSota virus backbone AbStraCt Newcastle disease(ND)is one of the most serious in fectious diseases of poultry，and virulent ND outbreaks．NDV，the causative agent of ND，is anon．segmented，single—stranded，negative sense RNA virus that belongs to the genus Avulavirus within the Paramyxovirinae subfamily of the Paramyxoviridae family．Its genome is approximately 1 5kb in length and encodes six proteins，namely，nucleoprotein(NP)，phosphoprotein(P)，matrix (M)，fusion(F)，Hemagglutini