植物病原真菌及重寄生菌的分离鉴定与侵染性研究-微生物学专业论文.docx

摘要由白粉茵(Erysiphauceae)导致的白粉病和核盘菌(ScIerotiniasclerotiorum)导致的茵核病是两种危害农作物较为严重的真菌病害。白粉菌危害严重，且防治困难。白粉寄生孢(Ampelomycesquisqualis)作为白粉菌上较为重要的重寄生菌，能够在大多数白粉菌上寄生，并对用来防治白粉菌的化学药物具有抗药性，因此白粉寄生孢具有防治植物白粉病的作用。但由于来源不同的白粉寄生孢菌株间存在一定的遗传差异，所以在利用白粉寄生孢防治白粉病时具有一定局限性，所以明确白粉寄生孢的资源状况，筛选新的有潜力的生防菌株就显得及其重要。由核盘菌侵染引起的菌核病是一种严重病害，核盘菌是一种放线状子囊真菌，其寄主范围和地理分布十分广泛，尤其在南方油菜产区发病严重，该病害在发病严重年份病株率可达50．80％，严重制约油菜品质和产量，造成经济上的损失，是危害油菜最严重的病害之一。本文对周口地区番茄白粉菌和分离自凤仙花白粉病上的白粉寄生孢以及感染了菌核病油菜上的核盘菌进行了显微观察、生物学特性、分子生物学以及致病性等研究，并取得了以下主要结果：1．对周口地区检出的番茄白粉菌进行了显微形态分析、核糖体DNA转录间隔区ITS(intertranscribedspacer)进行PCR扩增及进化分析。结果表明：在扫描电子显微镜下病菌分生孢子呈圆柱形或椭圆形，无支链，ITS序列与来自日本番茄上的0．neolycopersici(AB094991)和来自美国番茄上的0．neolycopersici(ABl63915)同源性最高聚为一支，序列同源性达到100％，分析结果表明，来自周口地区的番茄白粉茵为Oidiumneolycopersici。2．从河南省周口市采集感染白粉病的凤仙花植株，采用单孢分离法分离得到白粉寄生孢，对该菌进行菌落和显微形态分析，初步证明该菌株为A．qu括qualis。利用真菌通用引物ITSl和ITS4对所分离的菌株内转录间隔区进行PCR扩增，得至0578bp大小的片段，经过克隆测序和在GenBank中进行BLASTn分析，发现与德国和美国白粉寄生孢ITS序列的同源性达至U100％，进一步证明该分离菌株为A．quisqualis。并将白粉寄生孢接种在患有白粉病的大叶黄杨叶面上，经一周时间检查发现，白粉菌菌体由无色渐变成浅黄色或浅褐色，并渐渐萎缩至白粉层消失，说明从周口地区凤仙花白粉病病株上分离得到的白粉寄生孢具有防治白粉病的效果。3．通过探究白粉寄生孢最适的生长环境研究发现，其温度生长范围较广：10—30℃，菌株生长和产孢的最适温度为20C。白粉寄生孢在pH5．10时均可生长及产孢，其中pH值为7时最适宜其产孢。最适合生长的理想C源为葡萄糖，最适合的N源为蛋白胨，持续光照对菌株的生长及产孢具有明显的促进作用。 4．从河南省周口市采集感染菌核病的油菜，对核盘菌进行分离和鉴定。采用单孢分离法分离得到该菌系，对该菌系进行了菌落和显微形态分析，初步证明该菌株为S．sclerotiorum。利用真菌通用引物ITSl和ITS4对所分离的单菌系ITS序列进行PCR扩增，得到640bp大小的片段，经过克隆测序和在GenBank中进行BLASTn分析，发现与已知核盘菌属菌核病菌ITS序列的同源性达到100％，进一步证明该分离菌株为S．sclerotiorum。5．通过研究不同温度、pH值、C源和N源、光照、培养基对核盘菌的最适合生长环境的研究表明，核盘菌温度生长范围较广：15．35℃，其中25。C是菌株生长及产孢的最适温度，核盘菌在pH5—10时均可生长及产孢，其中pH值为8时最适宜其产孢。菌落生长较为理想的C源和N源为蔗糖和酵母浸膏，持续光照对菌株的生长及产孢影响不显著。6．将菌悬液分别接种在耐茵核病型油菜和易感菌核病型油菜上，4天后用台盼兰染色观察，发现耐病型和易感型均可被感染，菌丝侵入的方式两个基因型也没有差别，但菌丝长度不同。用菌核病侵染番茄和拟南芥植物时发现这两种植物也均可被核盘菌侵染。下一步的工作，将研究白粉寄生孢能否对核盘菌具有生物防治作用。关键词：白粉菌，白粉寄生孢，核盘菌，单孢分离，ITS序列，鉴定，致病性分析IIABSTRACTinPowderymildewandSclerotiniasclerotiorumaretwokindsofthemost importantplantdiseasesChina．彳唧efD形c甜quisqualisisanimportantmycoparasiteofpowderymildewfunguswithresistaIlcea2amstmostllsedchenlical如n酉cides，whichhaspotentialtocontrolpowderymildew．Becaused