应用clinprot技术建立早期诊断结直肠癌及肝转移预测模型-普外科专业论文.docx

应用CLINPROT技术早期诊断结直肠癌及结直肠癌肝转移摘要目的：应用CLINPROT(液体蛋白芯片飞行时间质谱)技术寻找与结直肠癌及结直肠癌肝转移相关蛋白质，比较正常人群、结直肠癌、结直肠癌肝转移(同时和异时)的差异蛋白峰，并进行验证和评价。方法：差异蛋白峰的分离：选取2004年3月-2009年9月间，复旦大学附属中山医院结直肠癌专业组结直肠癌病例201例，另选取健康体检人群45例作为对照。分为结直肠癌异时性肝肺转移组(肝转移32例，肺转移16例)、结直肠癌同时性肝转移组(SLM，n=65)、结直肠癌无转移组(CRC，n=88)及正常对照组四组(NORMAL，n=45)。术前空腹经外周静脉采血，以铜螯合磁珠试剂盒为载体，经C LlNPROT磁珠纯化、基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDl．TOF．MS)分析，得到蛋白质指纹图谱并运用BRUKER公司的CLINPROT专用软件分析比口较。建立肠癌异时性肝转移组、肠癌同时性肝转移组、肠癌无转移组及正常对照’组4个亚组。进行两两比较；建立异时性肝转移组、异时性肺转移组2个亚组，进行两两比较。预测模型的建立及验证：选取28例异时性肝转移血清标本、39例同时性肝转移血清、49例无转移血清及40例健康体检人群血清建立结直肠癌和结直肠癌肝转移的蛋白指纹图谱诊断预测模型。另外选取5例肠癌异时性肝转移血清、26例肠癌同时性肝转移血清、39例无转移血清及5例健康体检人群血清进行盲法验证，对所建立的诊断预测模型进行评估分析。根据第一部分图谱比较的结果，建立4个较为可靠的结直肠癌及结直肠癌肝转移早期诊断预测模型，并对所建立的模型进行交叉验证和评价。4个模型分别为肠癌无转移组(CRC)VS正常对照组(NORMAL)；肠癌无转移组VS同时性肝转移组(SLM)；肠癌异时性肝转移组(MLM)VS正常对照组；肠癌同时性肝转移组VS正常对照组。结果：一．差异蛋白峰的分离 1．结直肠癌无转移(CRC)VS结直肠癌异时性肝转移组(MLM)，得到0个差异蛋白峰，无统计学差异(P0．05)2．CRC VS正常对照组(NORMAL)，得到79个差异蛋白峰，其中15个蛋白峰P0．000001：44个蛋白峰P0．01：19个蛋白峰P0．053．CRC VS结直肠癌同时性肝转移组(SLM)，得到18个差异蛋白峰，其中蛋白峰M亿1865．94 P0．000001；8个蛋白峰P0．01：9个蛋白峰P0．054．MLMVSNORMAL，得到56个差异蛋白峰，其中5个蛋白峰P0．000001：21个蛋白峰P0．01：30个蛋白峰P0．055．MLMVSSLM，得到1个差异蛋白峰，M亿=4355．26P=0．0364应用CLINPROT技术早期诊断结直肠癌及结直肠癌肝转移6．SLMVSNORMAL’得到88个差异蛋白峰，其中14个蛋白峰P0．000001：46个蛋白峰P0．01：28个蛋白峰P0。057．异时性肝转移VS异时性肺转移，得到0个差异蛋白峰，无统计学差异(P0．05)二．预测模型的建立及验证1．CRCVSNORMAL：得到70个差异蛋白峰，CV(交叉验证)为92．25％，RC(识别能力)为96．71％．以此建立诊断预测模型，其敏感度为97．4％，特异性为100％2．CRCVSSLM，得到8个差异蛋白峰，CV=69．06％，RC=76．30％．以此建立诊断预测模型，其敏感度为92．3％，特异性为56．40％3．MLMVSNORMAL，得到54个差异蛋白峰，CV=88．88％，RC=93．49％，敏感性为100％，特异性为100％4．SLMVSNORMAL，得到57个差异蛋白峰，CV=87．08％，RC=90％，敏感性为100％，特异性为60％结论：1)通过各组之间的两两比较，有4次比较得到多个显著差异蛋白峰，结合散点分布图，有望建立4个较为可靠的结直肠癌及结直肠癌肝转移早期诊断预测模型。2)应用CLINPROT技术建立的血清蛋白图谱模型在预测结直肠癌以及结直肠癌肝转移中具有非常高的敏感性与特异性，可望成为很好的预测诊断工具。3)通过进一步的分离和鉴定，M／Z=4644的蛋白低表达或失活可能与结直肠癌的发牛发展相关；M亿=1865．94的蛋白可能成为预测结直肠癌同时性肝转移的肿瘤标志物；M／Z=4355．26的蛋白可能成为预测结直肠癌异时性肝转移的肿瘤标志物。关键词：结直肠癌，肝转移，差异蛋白峰，液体蛋白芯片，CLINPROT应用CLINPROT技术早期诊断结直肠癌及结直肠癌肝转移ApplicationofCLINPROTtechnologyinearl)dia2diagnosingcolorectalOlorectalcancerancerandandlivermetastasesAbstractObjective：Usin