显性核不育亚麻可育、不育花蕾mrna差异表达研究及差异片段分析-作物遗传育种专业论文.docx

摘要本文利用mRNA差异显示技术，以显性核不育亚麻兄妹交分离出的遗传背景极其相似的可育株和不育株为材料，对可育、不育花蕾中基因差异性表达进行研究，并对差异片段进行反向Northern杂交验证、克隆、测序以及序列分析。主要研究结果如下：(1)建立了适合核不育亚麻的DDRT-PCR体系。 (2)共获得差异片段52个。其中36个为不育差异片段，其余的16个为可育差异片段。(3)对这52个差异片段进行反向Northern杂交验证，最终获得了5个不育花蕾阳性片段：G+E07+1 00bp、G+E07+330bp、G+E07+830bp、G+S273+500bp、A+S267+300bp；2个可育花蕾阳性片段：G+$274—250bp、G+S274-450bp。(4)这些阳性片段经克隆、测序和BLAST序列分析，结果显示：G+E07+100bp 与植物GTP结合蛋白高度同源，在细胞信号传导过程中有调节作用，推测可能与核不育亚麻育性有密切关系；G+E07+330bp为亚麻花蕾的一段cDNA，可能与核不育亚麻花粉发育有关；G+E07+830bp与B．木糖苷酶同源性很高，它可能影响了亚麻花药、花粉中碳水化合物的代谢，从而导致了花粉的败育；G+S273+500bp与NAD+ADP核糖转移酶有很高的同源性；A+S267+300bp与分泌蛋白高度同源，推测它可能参与了核不育亚麻信号传导途径、形态发生、细胞凋亡等过程，最终影响了雄性不育的发生；G+$274．250bp和G+S274．450bp与已知植物的碱基序列和氨基酸序列同源性很低，推测它们可能是与显性核不育亚麻育性有关的新基因。关键词：亚麻；显性雄性核不育；mRNA差异显示；反向Northern杂交；序列分析StudyonmRNADifferentialExpressionBetweenMaleSterileandFertileFlowerBudsofFlaxandAnalysisofDifferentialFragmentsAbstractThemRNAdifferentialexpressionwascomparedbymRNAdifferentialdisplayPCR(DDRT-PCR)betweenmalesterileandfertileflowerbudsofflax．ThepositivedifferentialfragmentswereconfirmedbyReverseNorthernDotBlotting，andthensequenceanalysisofthesefragmentswascarriedoutwimthemainresultsasfollows：(1)TheoptimumconditionsofDDImPCRsystemofflaxwereestablished．(2)Amongthe52fragmentsthathadbeenobtained，36fragmentswerefrommalesterileflowerbuds；theother16fragmentswerefrommalefertileflowerbuds．(3)9fragmentswereconfirmedbyReverseNorthernDotBlotting．5fragmentswerespecific to male sterile flower buds：G+E07+100bp，G+E07+330bp，G+E07+830bp，G+$273+500bp，A+S267+300bp；2otherfragmentswerespecifictomalefertileflowerbuds：G+$274-250bp，G+$274-450bp．(4)ThepositivefragmentsweresequencedandanalyzedwithBLAST．TheG+E07+100bpwhichishomologoustoGTP—bindingproteinofplantsuggestedthatitmayplayanimportantroleinsignaltransduction．，nleG+E07+330bpmaybecloselyrelatedto fertility．TheG+E07+830bp，whichismostsimilartothesequenceofBeta-D—xylosidase，mayinfluencecarbonhydratemetabolisminflaxantherandpollen，resultinginpollenabortion．TheG+S273+500bpishomologoustoNAD+ADPribosyltransferase．TheA+S267