小胶质细胞巨型内吞泡周围微管骨架的形态学研究-神经生物学专业论文.docx

⑧论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：堂委员l：盟盟型熬副一副一授一煎煎筮趱塞一一一委员2：委员3：委员4：委员5：万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖湫学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：嚏∥留签签字日期：加J中年一月弓R学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解渐闭亡大学有权保留弗向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权潮强大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：≮降碴导师签名：签字口期：扫r坼年I；月孑同签字同期：万方数据浙江大学硕士学位论文致谢致谢在浙大读书的这几年，我要感谢我的导师段树民老师。为人方面，段老师和蔼可亲，对学生非常关心；学术方面，段老师学识扎实，对实验方面要求十分严格。感谢他在学业上对我的悉心指导；感谢他在规划方面对我的理解和包容；感谢他在做人做事方面为我树立了非常棒的榜样!其次，非常感谢我的师姐刘怿君。具体的实验步骤都是由师姐亲自传授的，师姐知识全面，带我们做实验的时候非常细心，对于我们提出的各种疑问以及实验中出现的差错也十分有耐心，详细为我们解答分析。开展的小组会便于大家积极讨论，对于锻炼我们的表达能力和逻辑思维大有裨益。接着，十分感谢513休息室里朝夕相处的各位：李慧泉、胡悦师姐，陈聪、杨俊华、杨鸿斌、余吴师兄，他们不仅在实验上帮助我解决了许多问题，生活上也对我照顾颇多。还要感谢实验室其他成员：高志华、李静老师；李叶菲、李霞、娄绘芳师姐；张晓醒、谭志兵、吴航军、周瑞、奚望师兄；还有张婷、覃丽明、王玮玮、苏云婷师妹；段夺、张斌、潘利彪师弟；技术员朱黎亚和吴小倩，谢谢他们平时对我的帮助。很高兴在浙大认识了一群志同道合的朋友：浙大管院的孙启梦、王宸宸；医学院沈颖老师组的谢亚君，药理的吴明兰，公卫的徐钦，分子的汤沁、池哲勖；浙大生科院的周光琪等等，使得我学到了许多学业之外的东西，对于我的人生观价值观的重塑有着很重要的影响，非常感谢他们陪我走过生命中这么美好的一段时光。最后，最要感谢的是我的家人。爸爸妈妈虽然在学业上不在行，但是在我遇到挫折时，还是最亲爱的他们为我进行心理疏导，帮我重树信心，克服一个又一个困难，让我能够顺利完成人生这一阶段的目标。当然还要感谢你们对我生活上的支持和帮助。2014年9月万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要小胶质细胞巨型内吞泡周围微管骨架的形态学研究浙江大学医学院神经生物学硕士研究生郭智斐导师段树民教授摘要实验目的：细胞骨架在维持细胞形态、运输细胞内物质、传递胞内外信号等方面有着非常重要的作用。细胞皮层处的微丝骨架重排，为细胞内吞提供动力来源；而微管在细胞内部呈放射状排布，作为胞内物质运送的轨道。实验室前期工作发现，小胶质细胞在迁移过程中可产生部分大型内吞泡。但目前尚未有研究描述微管在小胶质细胞内吞泡形成过程中的定位情况。本课题以ATP诱导小胶质细胞，产生大型吞饮泡，对吞饮泡周围的微管骨架结构进行形态学方面的初步研究。实验方法：培养原代大鼠小胶质细胞，利用AT聊s诱导产生吞饮泡。使用荧光标记葡聚糖(Dex把a11)对小胶质细胞吞饮泡进行标记后，在荧光显微镜下进行活细胞动态观察。在ATP诱导吞饮泡产生后，固定细胞，并利用免疫荧光方法，使用乙酰化、酪氨酸化及Ⅸ微管蛋白的抗体，标记微管骨架。同时，使用荧光标记的鬼笔环肽(phalloidin)标记纤维状微丝骨架。随后，利用激光扫描共聚焦显微镜，对巨型吞饮泡的形态、位置、数目，周围环绕的微管情况以及微丝的分布进行观察，并通过相关性分析，对吞饮泡周围的微管骨架特征进行解析。使用Rab5、Rab7、Rabll的抗体进行免疫荧光染色，分别识别早期内吞体、循环内吞体和晚期内吞体，以此明确册s引发原代培养细胞所产生的大型吞饮泡与胞内其它已知内吞泡之间的关系。此外，利用超高分辨结构照明显微镜(sR-sIM)对微管更细微的结构进行形态学观察，并用I删s软件对细胞骨架进行三维重构，得到大型吞饮泡周围微管精细结构的3D模型。II万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要实验结果：1．ATPys处理后的小胶质细胞内有大量内吞泡形成，这些内吞泡能够被dex订an标记，因此我们确认其为吞饮泡。2．部分巨型吞饮泡周围有微管结构环绕。3．对吞饮泡大小、位置的分析结果显