应用基因表达谱芯片筛选盆腔器官脱垂相关基因的实验研究-临床医学专业论文.docx

英文缩略词表ABBREVIATIoN缩略词英文全称中文全称 POPPelvic Organ Prolapse盆腔器官脱垂 SⅥStress Urinary Incontinence压力性尿失禁PFDPelvic Floor Dysfunction盆底功能障碍性疾病A删Arcus Tendineus Levator碰肛提肌腱弓BMIBody Mass Index体重指数 HI盯Hormone Replacement Therapy激素替代治疗、ⅣHIWorld’S Health Initiative世界卫生协会SEI蝴Selective Estrogen Receptor选择性雌激素受体调Modulator节剂Pelvic Organ Prolapse盆腔器官脱垂定量分 POP-QQuantitation期法MMPMartrix Metalloproteinase基质金属蛋白酶ECMExtracellular Matrix细胞外基质TIMPTissue Inhibitor of‘组织金属蛋白酶抑制Metalloproteinase剂LOXLysyl Oxidases赖氨酰氧化酶EREstrogen Receptor雌激素受体bpBase pair碱基对DEPC Diethylpyrocarbonate 焦炭酸二乙酯 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 RNase Ribonuclease 核糖核酸酶2摘要·研究目的： 1．应用基因表达谱芯片，筛选绝经后POP患者与正常绝经妇女主韧带组织中差异表达的基因 2．分析差异表达基因，探讨POP发生的分子机制·材料和方法： 1．在绝经状态、年龄、体重指数、产次等影响POP发生的重要因素匹配的前提下，选取3例POP与3例无POP对照的子宫主韧带组织标本。 2．组织标本行HE染色，Masson’s三色染色验证组织来源，并观察主韧带组织形态结构。 3．Trizol法提取总RNA，并对总RNA进行定量、质检。采用RNA扩增标记法合成生物素标记的eRNA，与Human Genome U133 Plus 2．0芯片杂交。4．用SAM软件筛选ISc幻re(d)I≥2，FC值大于2或小于O．5的差异表达基因。用MAS2．0软件对差异表达基因进行基因功能分类注释(GO)和代谢通路分析(Pathway)。5．实时荧光定量PCR验证DKKl，SFRPI，FZD5，WNTl6，COLlAl的差异表达。·实验结果：1．标本行HE染色、Masson’s三色染色观察，证实为子宫主韧带组织。POP组女 性子宫主韧带组织中胶原纤维与平滑肌束失去正常的排列，形态紊乱，可见胶 原纤维断裂，平滑肌束细碎。2．提取总RNA经定量和电泳检测，质量满足芯片杂交要求。杂交后芯片的各项检 测参数均达到质控要求，子宫主韧带组织与基因表达谱芯片的杂交模型建立成 功。3．筛选出179个在POP组和对照组之间差异表达的基因。其中包括20个功能未知 的基因。107个基因在POP组中表达上调，72个基因在POP组中表达下调。差 异基因涉及多种功能蛋白和代谢通路。其中Wnt信号转导通路变化最显著。4．实时荧光定量PCR证实DKKl，SFRPl，FZD5，WNTl6，COLlAl在POP组中表达明显升高，与芯片结果一致。●结论1．POP患者子宫主韧带组织中胶原纤维与平滑肌束细碎，排列紊乱。POP中编码I、III、V型胶原a1链蛋白的基因COLlAl、COL3A1、COL5AI的mRNA水平和MMP2的mRNA水平明显升高，提示POP中胶原合成增加，分解亦增强。 说明POP中胶原的合成和分解活跃，可能以分解为主，引起韧带支持结构功能 的改变，导致POP发病。2．人类全基因组表达谱芯片是一种有效的高通量筛选POP差异表达基因的研究方 法。本实验ISeore(d)lt2，FC≥2或FC≤0．5为标准筛选出179个在POP组和对照组之间差异表达的基因。其中包括20个功能未知的基因。107个基因在POP组中表达上调，72个基因在POP组中表达下调。 3．POP的病理生理过程复杂，涉及多种功能蛋白和代谢通路。其中Wnt信号转导通路的拮抗剂DKKl、SFRPl介导的神经退行性变可能与POP的发病密切相关。 4．实时定量荧光PCR验证目标基因DKKl，SFRPl，FZD5，WNTl6，COLlAl在POP组的表达明显高于对照组，变化趋势与芯片一致，佐证了芯片结果的可信性。【关键词】：盆腔器官脱垂(PoP)；主韧带；基因表达谱芯片；Wnt信号转导通路；Diekkopf-1(DKKl)：Secreted Frizzled Related Protein(SFRPl)4Microarray analysis of differential