- 1、本文档共67页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
腺相关病毒介导肝脏特异性表达凝血因子ix基因治疗血友病b-内科学(血液病学)专业论文
上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。必威体育官网网址□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不必威体育官网网址□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日目录第一部分 1摘要 1ABSTRACT3绪论 5实验材料及方法191.实验仪器及材料191.1. 仪器 191.2 实验材料191.3 细胞株202.1 大肠杆菌感受态制备202.2重组质粒的制备212.3 质粒小抽222.4限制性内切酶酶切分析 222.5 基因突变表达质粒的构建232.6 质粒大抽232.7 小鼠的繁殖242.9 小鼠高压注射252.10检测高压注射内参262.11 小鼠血浆中因子IX活性的检测(底物发光法)262.12小鼠血浆中因子IX 抗原的检测(ELASA)262.13细胞复苏传代与冻存282.14 细胞的转染29结果31.构建因子IX表达框架312.优化因子IXCDNA序列(密码子优化)323.引进因子IX-R338L功能获得性点突变354.比较各因子IX表达质粒表达因子IX的量及其活性375.寻找肝脏特异性调控元件395.1 白蛋白启动子及其增强子395.2内含子和多腺苷酸(POLYA)42讨论43第二部分45摘要45ABSTRACT47绪论49材料与方法511.试验仪器及材料511.1 细胞株介绍511.2. 药物配置 511.3. 仪器、试剂及耗材512. 试验方法522.1 细胞增殖抑制试验525.2 细胞凋亡sub-G1峰检测525.3Westernblot 检测蛋白表达535.4 非小细胞肺癌细胞裸鼠皮下成瘤535.5三氧化二砷和吉非替尼处理非小细胞肺癌患者胸腔积液样本53结果531. 三氧化砷和吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞增殖532. 三氧化二砷与吉非替尼诱导非小细胞肺癌细胞凋亡。543.三氧化二砷与吉非替尼诱导耐药细胞株EGFR降解554. 三氧化二砷与吉非替尼抑制裸鼠皮下成瘤模型肿瘤增长555. 三氧化二砷与吉非替尼抑制肺癌胸水中肿瘤细胞增殖56讨论57参考文献58致谢62第一部分腺相关病毒介导肝脏特异性表达凝血因子IX基因治疗血友病B摘要血友病B(Hemophilia B),又称乙型血友病,是一种由凝血因子IX基因缺陷而引起的X连锁隐性遗传的出血性疾病。临床治疗主要依赖于反复输注血浆或重组凝血因子IX,这种替代疗法虽然有效但是费用昂贵且有感染的风险。近年来国内外研究者在基因治疗临床应用研究方面取得了较大的进展,给血友病B患者带来长期缓解并治愈的希望。腺相关病毒作为单链线状DNA复制缺陷病毒,具有安全性高、免疫原性低、能介导基因在动物体内长期稳定表达。因此在血友病B基因治疗方面,腺相关病毒载体(AAV)是目前最有前景的载体。本项研究以当前AAV载体介导血友病B基因治疗进展为基础,先后构建优化了多种凝血因子IX表达框架来提高蛋白表达量及其凝血活性,包括对因子IXcDNA序列进行密码子优化,引进功能获得性R338L点突变和筛选肝脏特异性调控元件。其中候选调控元件有白蛋白启动子、前白蛋白启动子和α1抗胰蛋白酶启动子。我们选用血友病B小鼠作为主要模型展开研究,以尾静脉高压注射的方式导入目的基因,通过检测小鼠肝脏细胞特异性表达的因子IX水平及其凝血活性,从而筛选评估出最佳表达框架,用于合成基因治疗所需病毒载体。综上所述,与已发表临床试验中取得一定疗效的因子IX表达框架相比,我们的优化策略可以使因子IX表达水平提高2~3倍,而R338L点突变的引入可使其凝血活性提高6~8倍。这些研究成果为进一步合成基因治疗所需病毒载体提供了坚实的理论和实践基础,有望为中国血友病B患者提供一项终身有效的一次性治疗手段。关键词:腺相关病毒,血友病B,凝血因子IX,肝脏特异性调控元件LIVERSPECIFICEXPRESSIONOFFACTORIXMEDIATEDBYADENO-ASSOCIATEDVIRALVECTORFORGENETHERAPYOFHEMOPHILIABABSTRACTHemoph
您可能关注的文档
- 威廉·莫里斯图案艺术研究-艺术学专业论文.docx
- 央行财务实力与货币政策成本估计-金融学专业论文.docx
- 壳聚糖、胶原及其复合膜性质的afm研究-生物医学工程专业论文.docx
- 论中国画线的审美价值-美术学专业论文.docx
- 线粒体活性氧与糖尿病性白内障的关系及茶多酚干预作用的实验研究-中西医结合临床专业论文.docx
- 特质焦虑脑电信号的识别与分类分析-教育技术学专业论文.docx
- 一个客户积分管理系统的设计与实现-计算机应用技术专业论文.docx
- 基于渐进均匀化方法的典型非均质材料力学特性研究-机械制造及其自动化专业论文.docx
- 聚磷酸酯β-tcp骨修复材料的制备及体外模拟生物矿化-高分子化学与物理专业论文.docx
- 中国水彩艺术中的水墨精神-美术学专业论文.docx
文档评论(0)