载脂蛋白e、溶酶体神经氨酸酶、保护蛋白组织蛋白酶a和β-半乳糖苷酶基因缺乏小鼠耳形态和听功能改变初步分析-耳鼻咽喉科学专业论文.docx

摘要第一章载脂蛋白E基因缺乏小甑耳蜗形淼帮功麓改变目的 以往流行病学调查、l临床病例观察和实验研究提示高脂肌症与听力损 密之问可能存在一定的联系，但病理机制均是推测性的，缺少系统的心血管、耳 蠛及瞬功能颈寮豹证搀。为i琏：，我謇]采鼷萼|起盘l蓦代落异鬻鲍遗传王程，l、甄，确 定嵩脂盎症翻动脉粥样硬傀是否存在耳娲形态和瞬懿功能的损害戳及听功麓损 密与血脂、动脉粥样硬化和动脉内皮依赖性血管扩张功能之间的关系，为进一步 认识脂代谢异常致聋的发病机理及其有效的防治提供理论依据。方法国发高脂血症釉动脉撼样硬他的动物模掇，载腊蛋白E基因敲除apoE knockout+ApoE—KO)夸鬣，在10-12两羚分梵燕常饮食瑟褒§鹭绞食嚣缓， 给高脂饮食14周，相同遗传背景的(257BL／6J小毓辩对照。通过先进的离体斑 管内皮依赖性扩张功能测试，主动脉粥样硬化形态和定量分析，短声(click)和 熄纯音(tone pips 8 kHz，16 kHz和32 kHz)诱发的孵觉脑干反应(ABR)听闽 测试，全耳蜗连续韬片、蘩疯貘镇冀窝系缎戆计数，～鬣囊二氧合酶(NOS)免疫 组亿染色，缩合听闺与血浆憨艟固醇和动脉粥样硬纯损害的相关分析，观察正常 和高脂饮食的ApoE．KO小鼠耳蜗形态和功能改变，以及听力损害与血脂水平和渤脉粥样硬化程度的相关性。结果正常饮食的ApoE-KO小鼠发展为显著的离月旨盘疰和是发为牲动脉粥 榉矮纯损害，薅l誓後食逶一步撵蠢盘§蠢零平帮摸害程凌。ApoE-KO夺鬣Zt蘸耱 碱(ACh)诱露的主动脉内皮依赖性血管扩张功能严激受损，高脂饮食的动物这 种皿管扩张功能基本消失。襁10-12周短声、8 kHz和16 kHzABR听闽，ApoE—KO 小鼠较对照C57BU6J提高5。8 dB SPL，32 kHz昕阐提高16 dB，舆有显著的麓努(短声，8kHz，32kHz，p0，0001；16kHz，P--0。0002)。24—26瘸，程短声，8kHz 釉16 kHz，ApoE-KO正常和高脂饮食小鼠听阈分掰较C57BL／6J褥高ll—13 dB 和21．24 dB SPL，而32 kHz，两组听阈均提高35 dB，与对照小鼠比较，均具有 驻著性的统计学意义(p0．0001)。高脂饮食组在短声，8和16 kHz听阈较正常 饮食组各提赢lO dB SPL，魄其有统计学上豹差异(p《O．05)，表明ApoE-KO小 藏主要静帮最蓬的爵力损髻在32 kHz或激上静毫鞭。龌维ApoE-KO，l、鬣短声、 16 kHz和8 kHz听阈均与舰浆总胆固醇水平和动脉粥样硬化损害程度呈正相关(p0．001．0．05)。两组ApoE．KO耳蜗底转和中转OHC和IHC损密，以底转最 明显，底转邋端OHC丧失攀在正常饮食、高脂饮食ApoE-KO和对照动物分别 兔23％、57％髑10％。部分囊l冀壤食ApoE-KO，l、簸藏转co掇嚣缨戆港失，蒸 底膜、盖膜和斑管纹硬化。大多数高滕饮食组ApoE-KO小鼠耳蜗螭轴螺旋动脉 (spiral modiolar artery,SMA)内膜和中膜明显增厚，管腔狭窄。两组ApoE-KO 小鼠主动脉璧和耳蜗IHC、OHC及螺旋神经节细胞内皮性一氧化氮台酶(eNOS) 活性降羝。结论①零研究首次斑雳遗传工稷鹣模垂动裙ApoE—KO夺鬣诞黉离虢蛊癃 和动脉粥样硬化对耳蜗形态和听力产生明显损害，听力损害与血浆总胆固醇水平 和动脉粥样硬化病变的严黧程度呈正相关。②首次发现严重的高脂m症和动脉粥 楼硬化可引起恣耳血管结搦的改变，表现为SMA管照增厚和管胶狭窄，这可能 楚导致耳疆形态窝舞力攒塞懿主要添嚣。③麦度袄羧瞧鑫管功麓薅褥彝耳甄eNOS活性降低可能与听力损害有关。@ApoE—KO小鼠不仅可成为我们研究人类 高脂血症和动脉粥样硬化疾病对昕功能影响的动物模型，而且可为防治这类脂代 谢障碍所致的心血管疾病和听力损害开发有效的治疗策略。关键词载脂蛋白E，基因敲除，耳蜗，毛细胞，聋，高脂血症，动脉粥样硬化，小鼠第二章溶酶体神经氨酸酶、保护蛋白／组织蛋白酶A和13．半乳 糖苷酶基因缺乏小鼠耳形态和听功能改变目的溶酶体贮积疾病包括一大类由于溶酶体水解酶缺乏引起的遗传代谢 性神经变性疾病，其中部分可致耳聋。唾液酸沉积症、半乳糖唾液酸沉积症和 GMl．神经节苷脂沉积症是因神经氨酸酶、保护蛋白／组织蛋白酶A和／3一半乳糖 唾液酸酶单一或结合性缺乏所致。这三种酶基因敲除的小鼠模型在全身大多数组织和器官的临床、生物化学和病理学特征已被确定，而它们是否也存在听力和耳形态改变目前不清楚。为此，我们确定和比较这三种小鼠模型耳形态和听功能的 损害及其程度，探讨这些疾病致聋的病理生理学机制，为该类遗传性疾病的防治 提供理论依据。方法分别利用小鼠溶酶体神经氨酸酶