小鼠先天性白内障新型自发突变基因定位克隆-生物化工专业论文.docx

小 鼠先 天性 白内障新 型 自发 突 变草 因的 定位 克 隆D IM it4 lO ( 17eM ) 和D IM itl02 (73eM ) 之 间 ; 第 二 步 ，在 该 区段 内 (56 cM 长 ) 进 一 步 挑 选 遗 传 位 标 ，单 倍 型 分 析 结 果 将 白 内障 基 因 定 位 到 D IM it2 36 (2 5 .7eM ) 和D IM it4 6 (4 3 .IcM ) 之 间 ; 第 三 步 ，选 择 D IM it23 6和D IM it46 之 间单 倍 型 不 同 的样 本 13 个 ，再 次 挑 选 遗 传 位 标 D IM itlg (36 .9eM ) 和 D IM it7 (4 IcM ) 进 行 分 型 ，将 白 内 障 相 关 基 因进 一 步 定 位 到 D IM it236 和 D IM itlg 之 间 约 11。M 内 ，此 区 间 内存 在 晶 状 体 蛋 白基 因C ryg (32cM ) ，故 选 择 C ryg 为 候 选 基 因 。 第 四 步 ， 反 转 录 出C ryg 六 个 亚 基 的cD N A ，cD N A 测 序 分 析 发 现 在 白 内 障 纯 合 子 样 本 的 C rygc 亚 基 第 3 外 显 子 的Z ogbp 处 缺 失 一 个 碱 基 ， 该 突 变 在 C ry gc 亚 基 第 3外 显 子 的76 位 引 入 终 止 密 码 子 ，形 成 截 短 蛋 白 。为 进 一 步 验 证 缺 失 突 变 是 引起 白 内障 的原 因 ，对 大 样 本 进 行 测 序 和 单 核 普 酸 鉴 定 ，结 果 表 明 缺 失基 因 型 和 白 内障 表 型 是 完 全 连 锁 的 ，因 此 该 突 变 应 该 是 引 起 白 内障 的 原 因 。由于 突 变 位 于 高 度 保 守 的第 四个 关 键 基 序 中 ，当其 变 短 时 ，虽 然 R T 一P C R 半 定 量 表 明C rygc 亚 基 m RN A 能 正 常 转 录 ，但 翻 译 成 蛋 白时 ， 就 会 影 响YC 一晶状 体 蛋 白的 正 常 功 能 。生 物 信 息 分 析 突 变 的YC 一晶状 体 蛋 白时 ，突 变 型 蛋 白第 二 结 构 域 的H M M 是 从 1一 “ ，丢 失 了 巧个 氨 基 酸 ，第 二 结 构 域 中 的保 守 区被 破 坏 、变 短 ，而 保 守序 列 对 维 持 蛋 白质 的 结 构 和 功 能 是 相 当重 要 的 ，变 短 则 影 响 了 晶状 体 蛋 白 的 功 能 ，可 能 是 形 成 白 内障 的 原 因 。在 蛋 白质 三 维 结 构 分 析 中 ，Yc 一突 变 蛋 白 的C - 末 端 缺 失 一 个 p一折 叠 ，并 且 在 检 测 三 级 结 构 模 型 的健 康 度 时 ，因 突 变 型 蛋 白从 第 3 外 显 子 的76 位 氨 基 酸后 缺 失 ，导 致 原 子 经 验 平 均 力 势 增小 鼠先 天性 白内障新 型 自发突 变基 因 的 定位 克隆加 ，蛋 白结 构 不 稳 定 。综上所 述 ，无 论 从 基 因型 与 白 内障表 型 的遗 传 连 锁 、突 变 基 因本 身 的性质 变 化 均 表 明 ，单碱 基 缺 失 是形 成 该 自发 突 变 白内障小 鼠的成 因 。关键 词 : 遗 传 性 白 内障 、动物 模 型 、全 基 因组 扫 描 、精 细 定位 、RT 一PC R 、生物 信 息 学小 鼠先天性 白内障新 型 自发突 变基 因的 定位 克隆C O N G E N IT A L C A T A R A C T S P O N T A N E O U S M U T A I ，I O N G E N E ID E N T IF IE D IN M I C E B Y P OS IT O IN A L C L O N IN GA B S T R A C TC o n g e n i ta l e a ta ra e t 15 le n s o P a e i ty a t b 谊 h o r a f te r b 谊 h o e e u r re d w i th in th e f irst y e a r. T h e re a re 0 .4 % o f n e w b o rn s a re e o n g e n ita l e a ta ra e ts a n d e o n g e n ita l e a ta ra