临床标本的细菌学.pptVIP

临床标本的细菌学鉴定1（综合性实验） 教学目的和要求 熟悉临床标本一般细菌鉴定的流程 掌握化脓性球菌的鉴定方法 掌握肠道细菌的鉴定方法 掌握球菌及肠道杆菌的生物学特性 本次实验内容 临床标本细菌学鉴定的方法及一般程序 血液标本的细菌检测（1） 粪便标本的细菌检测（1） 病原性球菌生物学特性 内容一：临床标本细菌学鉴定的方法及一般程序 细菌的鉴定依据 形态学特性: 形状、排列、染色性、特殊结构 生理特性： 菌落特征（鉴别培养基）、 溶血现象（血平板）， 细菌的生化反应（鉴别培养基） 抗原: 细菌的致病性： 内容二：临床标本细菌学检查 血液标本的细菌学检测 血液标本为无菌标本，鉴定出细菌即有诊断意义 血液标本中常见致病菌 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌 乙型溶血性链球菌、甲型溶血性链球菌、 肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌 铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、厌氧菌等 革兰染色：染色性及排列 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象普通平板（示教） 菌落黄色（有时黄色不典型） 菌落白色或柠檬色 血浆凝固酶试验（示教） 鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 原理：凝固酶可催化： 血浆中的纤维蛋白原 → 纤维蛋白→血浆凝固 方法（见实验指导16页） 在抗凝血浆中加入菌液， 37℃ 3小时 结果：金黄色葡萄球菌（阳性） 表皮葡萄球菌（阴性） 病原性球菌的生物学特性 链球菌在血平板上的生长现象（示教）： 肺炎球菌与甲型溶血性链球菌的区别试验（示教） 胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性） 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性） 病原性球菌的生物学特性 脑膜炎奈瑟菌在巧克力色培养基（示教）： 专性需氧，5%CO2 菌落无色透明、细小，露珠状 病原性球菌的生物学特性 血平板上的病原性球菌生长现象的区别要点： 内容二：粪便标本细菌学检查 粪便标本：为有菌标本，在标本中分离、并鉴定出致病菌才有诊断意义。 粪便标本中常见正常菌群：大肠埃希菌 致病菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌 大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌生物学特征比较 半固体双糖铁培养基培养结果（下次实验课示教） 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象； 注意观察菌落特征 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、（甲、乙）型溶血性链球菌及肺炎球菌在血平板的生长现象； 注意观察菌落特征、溶血环 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌胆汁溶菌试验 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌菊糖发酵试验 脑膜炎双球菌在巧克力血平板的生长现象 注意观察菌落特征 实验材料： 每组一套标本，编号1号--8号 每人1个（注意勿污染，下个班还用） 每人1块平板（SS平板或血平板） 操作1：临床标本的分离培养（分区划线） 血液标本：接种血平板 粪便标本：接种SS平板 操作2：标本的革兰染色（初步诊断） 操作3：无菌分装培养基（下次实验用） 观察临床标本的分离培养物 血平板：观察溶血现象，菌落颜色 SS平板：观察菌落颜色 鉴定：挑取可疑致病菌菌落进一步鉴定 挑取可疑致病菌涂布做革兰染色 明确诊断 示教：肠道杆菌生化试验 * 加强与临床实践的联系，从“对已知细菌的认知”到“未知细菌鉴定”。 锻炼学生发现问题,分析问题,解决问题的能力。 培养学生灵活运用基础知识和基本技能的能力。 要求 目的 方法 革兰染色 培养 抗原抗体反应 动物实验 增 菌 接种平板培养基，分离单个菌落 各种鉴定试验 涂片染色 快速诊 断试验 生化试验 血清学实验 涂片染色 药敏试验 动物试验 初步诊 断报告 明确诊断报告 细菌学检验的一般程序 挑取可疑菌落 病原性球菌的生物学特性 怎么区分？ 金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶： 表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环 金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 β溶血 在血平板的生长现象（示教） 溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌 ?溶血，菌落灰白色、细小 ?溶血，菌落灰白色、细小 ?溶血，菌落灰白色、细小 ？ γ溶血 （无溶血） ?溶血 （宽、透明）