动物微生物--病毒的增殖和培养.pptVIP

病毒的增殖和培养 学习目标 知识目标 理解复制的定义 理解病毒复制的基本过程 掌握病毒的人工培养方式及应用 能力目标 具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础 主要内容 病毒的增殖 复制的概念 复制的基本过程 病毒的培养 动物接种 禽胚接种 组织培养 重点与难点 重点 病毒复制的基本过程 病毒的人工培养方式 难点 病毒的复制过程 病毒的增殖方式─复制 复制概念 是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。 病毒复制的基本过程 吸附 穿入 有囊膜病毒的穿入 囊膜与细胞膜融合 吞饮作用 无囊膜病毒的穿入 直接穿入 吞饮作用 囊膜与细胞膜融合 有囊膜病毒的穿入 脱壳 多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。 不同病毒的脱壳又各有特色，例如： 新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。 痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。 呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。 小RNA病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。 脱壳 生物合成 生物合成即病毒遗传信息的控制下合成病毒的各种组成成分。 早期:病毒特异性酶的合成 病毒核酸复制 病毒结构蛋白质合成 生物合成 装配 新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。 成熟与释放 成熟 由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。 释放 无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放 有囊膜的病毒：出芽释放 成熟与释放 塞里基森林病毒的出芽释放 HIV 的出芽与成熟 艾滋病毒的出芽释放 病毒复制的过程 病毒的培养方式 动物接种 禽胚接种 组织培养 动物接种 动物选择 本动物 实验动物 最理想的是GF动物或SPF动物。 病毒增殖结果观察 动物死亡、症状、病变等。 动物接种的用途 病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。 禽胚培养 禽胚选择 最好选择SPF胚 病毒增殖结果观察 常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形， 绒毛尿囊膜上出现痘斑。　 接种途径 禽胚接种的用途 家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。 禽胚接种途径 绒毛尿囊膜接种 10～13日龄鸡胚，如传喉。 尿囊腔接种 9～12日龄鸡胚， 如新城疫。 卵黄囊接种 6～8日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖 。 羊膜腔接种 10～11日龄鸡胚， 主要用于正粘病毒和副粘病毒。 组织培养 组织培养 细胞培养 细胞选择 增殖结果观察 优缺点 应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法 细胞选择 兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。 增殖结果观察 病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微镜即可观察到。 有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象（如流感病毒等）。 有时用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。 组织细胞培养病毒优缺点 组织细胞培养病毒优点： 离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于生长。 便于人工选择多种敏感细胞供病毒生长。 易于观察病毒的生长特征。 便于收集病毒作进一步检查。 细胞培养病毒缺点 成本和技术水平要求较高，操作复杂，在基层单位尚未广泛应用。 谢　谢！ 1．气室 2．卵壳 3．卵黄囊 4．卵白 5．尿囊腔 6．绒毛尿囊 7．胚胎 8．羊水腔 9．胚外体液膜用的鸡胚 * * 吸附 穿入 脱壳 生物合成 装配与释放 静电吸附 非特异吸附　可逆 与受体结合 病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲和力的特异性吸附　不可逆 囊膜与细胞膜融合 吞饮作用 吞饮作用 形成内吞小体 吞饮作用 穿入（无囊膜病毒） 直接穿入 穿入（无囊膜病毒） 直接穿入 穿入（无囊膜病毒） 吞饮作用 有囊膜病毒的生物合成 无囊膜病毒的生物合成 有囊膜病毒的释放 囊膜来自于细胞膜 有囊膜病毒的释放 囊膜来自于细胞核核膜 无囊膜病毒的释放 正常的T.C 艾滋病毒感染的T.C 艾滋病毒的出芽释放 有囊膜病毒的复制 * *