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临床病原学实验诊断 山东大学齐鲁医院检验科 孙恩华 感染性疾病: 指各种病原体(病原微生物、寄生虫)感染机体后所引起的传染性和非传染性疾病 临床病原学检查的目的 　　 是确定感染的发生和性质，及早明确诊断，尽早选择适当的治疗方案，采取有效的预防措施，防止感染可能广泛传播所造成的危害． 导致感染性疾病的病原体 细菌、病毒、螺旋体、支原体、 衣原体、立克次体、放线菌、真菌、 寄生虫 现代感染性疾病的流行病学特点 新传染病陆续被发现，如O 157 大肠杆菌出血性肠炎、疯牛病、埃博拉出血热、新型肝炎病毒 、SARS病毒、甲型H1N1流感病毒等 一些业已绝迹的老传染病又重新出现，如梅毒、霍乱、结核等 细菌出现多重耐药性，导致抗感染治疗困难。 医院感染和条件致病菌感染增加，免疫功能低下人群增多 临床病原体检查的基本程序 医生、护士、病人、检验师：正确采集运送标本。 检验科：直接镜检、免疫学和分子生物学检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验——报告结果。 医生：明确诊断、合理用药。 第一节 标本采集、运送和检测方法 标本采集的基本原则 发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查。 二、三级医院微生物标本送检率不应低于70%。 尽量在抗菌药物使用前采集标本。采集标本前应至少停药3天。如病人不能停药，应在下次抗生素使用前采集标本。 标本采集时，应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其它杂菌的污染。 标本采集后应立即送至微生物实验室，放置时间过长会影响检验结果。如不能立即送检，一般应放在冷藏条件下保存送检。但某些菌株（如淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、嗜血杆菌、肺炎链球菌等）不仅要及时送检，而且在送检过程中要注意保温。 盛标本的容器必须经灭菌处理，但不得使用消毒剂和酸类处理（到细菌室领取），以免残留液体影响细菌的生长。送检时，标本切勿污染容器的瓶口和外壁，防止污染和传播。 送检标本应注明标本来源和检验目的，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。 血液 标本的采集 1.采血时机及次数: 采血时机是明确诊断的第一重要因素。无论何时，采集血培养应该在使用抗生素之前进行。 怀疑原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者：在寒战或发烧初期立即采集2或3份血培养。 不明病因的发热，如隐性脓肿，伤寒热和波浪热：发热开始采集2或3份血培养。24h至36h后，估计温度升高之前（通常在下午）立即采集2份以上血培养。 感染性心内膜炎，对急性心内膜炎患者1h（2h内）采集3份血培养，如果所有结果24h后阴性，再采集2份血培养。入院前两周内接受抗生素治疗的患者，连续三天采集血培养，每天2份。 * 一份血培养定义：同一穿刺所获得的血液接种到2瓶血培养瓶中（需氧瓶和厌氧瓶） 2.采血部位 多次采血时, 应在不同部位进行。 不要从血管插管内采血。 3. 采血量 成年人采血量为10~ 20ml, 新生儿与婴幼儿为1~5ml。 脑脊液标本的采集 由临床医生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于无菌容器中立即送检，不能暂时保存于冰箱中。 （因引起脑膜炎的病原体脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等抵抗力弱，不耐冷，易死亡） 胸腹水等穿刺液标本 无菌注射器穿刺抽取，置于抗凝与不抗凝无菌容器中立即送检（或直接注入血培养瓶）。 脓性标本应考虑同时做厌氧培养. 尿液标本的采集 应在用药前或停药3天后留取标本, 并使尿液在膀胱内停留6~8h以上,起床后第一次尿样阳性率较高. 无菌采集中段尿 如考虑厌氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集标本。 排尿困难者考虑导尿采集标本。 呼吸道标本采集 类型：鼻咽拭、痰和经气管采集的标本。 上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析时应予考虑。 痰标本的采集 采集时间：晨痰，且在取痰前用清水反复漱口。 方法： （1）自然咳痰法： （2）气管镜下采集 （3）气管穿刺法。 创伤及脓肿标本的采集 无菌生理盐水擦洗表面后，无菌棉拭子采集病灶深部的脓液和分泌物，置运送培养基送检。 瘘管可用无菌手术取组织块或碎片放入无菌管内立即送检。 脓肿标本用碘酒、酒精消毒皮肤后，无菌注射器抽取脓液，也可切开排脓后用无菌棉拭子沾取，或将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌容器内送检。封闭性脓肿怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。 采样前病灶局部应避免使用抗菌药物或消毒剂。 粪便标本的采集 自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。 排便困难者，采用直肠拭子采集。 怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接种或将标本置于碱性蛋白胨水或卡-布运送培养液送检。 传染性腹泻应连