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75L细胞反应器生产工艺的建立 重点课题 1-3月工作计划 1.完成二批次的75L细胞反应器的发酵。优化和完善细胞培养阶段中细胞浓度的稳定性，达到接种病毒的要求。 2.用500ML搅拌瓶制备四批狂犬病细胞毒。 3.森松公司50L细胞反应器的预试，考核细胞培养阶段细胞的生长情况。 4.细胞毒株的筛选。 实验进展 75L细胞反应器的发酵 1.完成了三批次的细胞反应器的发酵。 批号20110201 2.收获狂犬原苗60L，抗原量为1：4。 3.细胞浓度的稳定性不够72H细胞浓度1.1×10672H细胞浓度3.4×10672H细胞浓度1.5×106 实验进展 利用500ML搅拌瓶制备狂犬细胞毒 1.完成四批狂犬细胞毒 批号2011030220110304。 2.病毒抗原量接近1：16 病毒滴度为7.5LgLD50/ml 实验进展 森松公司50L细胞反应器的预试 1. 发现有10%的空载体破损，碎片游离于培养液中。 原因：搅拌系统存在缺陷。 2. 因载体破损，造成培养液渗透压改变，大量的接种细胞裂解 。 实验进展 细胞毒株的筛选 实验讨论 1.细胞培养阶段中细胞浓度稳定性不够。 细胞培养72H左右，镜检发现载体上的细胞有团缩现象，培养液中有游离细胞。 三批次发酵中，提高了通气量，溶氧浓度等，但效果不明显。 实验讨论 下一步打算 1.已召集厂家和有关专家进行了探讨。 初步解决方案： ⑴通气方式：改为下通气方式。必须控制液体表面泡沫的高度。 ⑵大幅提高搅拌速度。必须观察载体和细胞生长情况。 实验讨论 成员及工作任务 课题组参加人员、职称、分工 姓 名 职 称 分 工 工作 量 吴书军 工程师 细胞反应器发酵 100% 唐丽丽 工程师 细胞传代，细胞毒，发酵 100% 何成 研究实习员 下游纯化，发酵，检测 100% 田石华 研究实习员 细胞毒株筛选，发酵 100% 竺满溢 研究实习员 下游纯化，发酵 100% 谢谢各位 * * * * 2010-6 楼觉人 病毒株/代次 8 9 10 11 12 13 14 ① 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:4 1:4-1:8 1:8 ② 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:4 1:4-1:8 1:8 ③ 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:4 1:4-1:8 1:4-1:8 ④ 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:4 1:4-1:8 1:4-1:8 ⑤ 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:2-1:4 1:4-1:8 1:4-1:8 ⑥ 1:2 1:2 - 1:4 1:2-1:4 1:4-1:8 1:4-1:8 ⑦ 1:2 1:2 - 1:2-1:4 1:4 1:4-1:8 1:4-1:8 ⑧ 1:2 1:2 - 1:4 1:2-1:4 1:2-1:4 1:8 存在的问题 5L-5d 30L-2d 30L-3d 实验讨论 2. 酵的细胞照片 30L-1d 30L-4d 2.利用500ml搅拌瓶制备细胞毒 工艺基本确定，且每批的病毒抗原量和毒力滴度比较稳定。继续制备细胞毒。 3.细胞毒株的筛选 病毒抗原量已有抬头的趋势，继续盲传，传至病毒抗原量稳定且表达量高的毒株。 * *
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