第十六章沉淀分离法 生物制药工艺学.pptVIP

（三）温度（低温沉淀） 有机溶剂存在下，大多数蛋白质的溶解度随温度降低而显著地减小。 （四）无机盐的含量 低盐：有利于沉淀，还有保护蛋白质，防止变性。 高盐：增大蛋白质在有机溶剂―水溶液中的溶解度，沉淀物中可能夹带盐。 * 多价阳离子，如Ca2+、Zn2+能与蛋白质结合形成复合物，使蛋白质溶解度降低。 胰岛素精制： * （五）某些金属离子的助沉淀作用 （六）样品浓度 浓度小时，增加溶剂投入量和损耗。 浓度大时，增加共沉作用，降低分辨率。 蛋白质浓度0.5%～2%； 粘多糖浓度1%～2%。 * 第三节 其它沉淀方法 一、等电点沉淀法 对于两性物质，等电点时净电荷为零，分子间排斥电位降低，吸引力增大，能相互聚集起来，发生沉淀。 杂蛋白 * 胰岛素纯化： 胰岛素 pH8 除去碱性杂蛋白 pH3 除去酸性杂蛋白 * 金属离子沉淀：与生物分子的酸性功能团作用的金属复合盐法； 有机酸类复合盐沉淀:与生物分子的碱性功能团作用的有机酸复合盐法（如苦味酸盐、苦酮酸盐、丹宁酸盐等）。 * 二、成盐沉淀法 1．金属离子沉淀： Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Zn2+、Ca2+、Ba2+、Mg2+等； 2．生成有机酸类复合盐沉淀 （1）丹宁即鞣酸 （2）雷凡诺 （3）三氯乙酸（TCA） * 雷凡诺 * 猪心提取液 洗脱液 上清液 上清 细胞色素C 沉淀（去除） * 吸附 人造沸石 盐析 45%饱和硫酸铵 沉淀 TCA 透析 三、亲和沉淀 利用亲和反应原理，将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物（亲和沉淀剂），该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来。 中性可溶，酸性沉淀。 * * 四、高分子聚合物沉淀 水溶性非离子型高分子聚合物，如不同分子量的聚乙二醇（PEG）、葡聚糖、右旋糖苷硫酸酯等，能使蛋白质水合作用减弱而发生沉淀。 五、表面活性剂 十六烷基三甲基季胺溴化物（CTAB） 十六烷基氯化吡啶（CPC） * } 酸性多糖 * 六、选择性变性沉淀法 热变性沉淀法 酸碱变性沉淀法 利用试剂（氯仿） * 固相析出分离法 第一节 盐析法 第二节 有机溶剂沉淀 第三节 其它沉淀方法 一、等电点沉淀法 二、成盐沉淀法 * 第四节 结晶(crystallization) 定义：溶液中的溶质在一定条件下因分子有规则的排列而结合成晶体。 通过结晶，溶液中的大部分杂质会留在母液中，经过滤、洗涤可得到纯度高的晶体。 * 一、结晶过程 指溶质自动从过饱和溶液中析出形成新相的过程。 C2 — 小晶体的溶解度；C1 — 普通晶体的溶解度； ρ — 晶体密度；M — 晶体质量； σ — 晶体与溶液间的界面张力； γ2 — 小晶体的半径； γ1 — 普通晶体的半径； * 结晶包括三个过程： (1) 形成过饱和溶液; (2) 晶核形成; (3) 晶体生长。 * 浓度温度图 * 二、过饱和溶液的形成(结晶方法) （一）、蒸发法 （二）、温度诱导法 热盒技术 （三）、盐析结晶法 （四）、透析结晶法 （五）、有机溶剂结晶法 * 温度诱导法 * 盐析结晶法 * 透析结晶法 * （六）、等电点法 （七）、微量扩散法 （八）、化学反应结晶法 调节溶液的pH或向溶液中加入反应剂，生成新物质，结晶析出。 （九）、共沸蒸馏结晶 * 等电点法 * 化学反应结晶法 * 综合利用 * 三、提高晶体质量的途径 工业上通常希望得到粗大而均匀的晶体，便于过滤与洗涤。 （一）、晶体大小 影晶体大小的主要因素有过饱和度、温度、搅拌速度、晶种等。 * 晶种 * （二）、晶体形状 改变晶体外形，可用:选择不同的溶剂、控制过饱和度、结晶温度、调节溶液的pH和有目的地加入某种能改变晶形的杂质等。 （三）、晶体纯度 晶体表面具有一定的物理吸附能力。 重结晶：即将晶体用合适的溶剂溶解再次结晶。 * 重结晶(recry