结核菌分离培养-全国结核病流行病学抽样调查.pptVIP

20061019 结核菌分离培养全国结核病流行病学抽样调查 培养 — 获得药敏试验所需的纯培养物 直接影响菌阳患病率 培养标本的选择 3份痰标本均为阳性：选取阳性级别高的2份痰标本进行培养； 3份痰标本2份阳性：选取2份阳性痰标本进行培养； 3份痰标本1份阳性：选取阳性标本和1份质量好的阴性标本进行培养。 培养标本的选择 3份标本均为阴性，选择性状比较好的两份标本； 3份标本均为阴性且性状大致相同，选择晨痰和夜痰。 四、结果的观察与报告 接种后第3、7天各观察一次菌落生长情况 此后每周观察一次，直至满8周 每次观察记录菌落生长及污染情况 结核分枝杆菌的生长要求： 专性需氧菌 最适PH为6.5～7.2 温箱设定温度为36℃,温度范围35－37 小结 – 操作流程 * * 按涂片结果选择2份标本进行培养 培养标本选择优先顺序：高涂阳级别、阳性、标本性状、晨痰、夜痰； 培养标本的选择 本调查中采用的培养方法为 — 简单法：氢氧化钠处理 直接接种酸性罗氏培养基 培养所需设备— 生物安全柜 恒温培养箱 涡旋振荡器 －废弃物处理：高压灭菌器 基本步骤 标本前处理（去污染） 接种 孵育 报告结果 原理：分枝杆菌对酸碱有相对强的耐受力。 目的：液化标本、去除杂菌、分离出分枝杆菌 原则： - 尽可能杀灭标本中的杂菌 - 尽可能保存标本中的分枝杆菌 标本前处理 前处理的步骤： 取1－2ml痰标本至前处理管 视标本性状加入1－2倍体积的4％氢氧化钠 震荡30－60秒至标本完全液化 室温静置15分钟（整个处理时间不得超过20分钟） 操作 痰标本 1－2倍 4% NaOH 振荡匀化 静置 15分钟 前处理的注意事项： 标本留取后4℃保存、尽快处理 选择标本中脓性、血样、干酪样的部分进行培养 避免弱处理和过处理 - 前处理液的浓度 - 处理时间 避免交叉污染－－－先阴性、再低涂阳、后高涂阳 吸取标本、加液、涡旋震荡时可能产生危险气溶胶 37℃竖直培养8周 均匀接种0.1ml, 2支/标本 斜面向上，37℃ 水平放置24小时 接种和孵育 接种的注意事项： 培养基斜面的背面标注（标本号、姓名、接种日期） 标本应尽可能布满斜面 避免污染： - 使用灭菌的移液管 - 无菌手法操作 - 接种后避免液体流至瓶口、瓶盖 接种量：0.1毫升（2滴） 可能产生危险气溶胶 孵育的注意事项： 接种后斜面向上孵育24小时 之后培养基直立继续孵（检查瓶盖是否拧紧） 温度监测 光线的影响－避免使用可视窗的温箱 满8周后未见菌落生长，可报告分枝杆菌生长阴性，培养管高压后丢弃； 发现显著污染以至无法观察结果，记录“污染”，培养管高压后丢弃； 发现疑似分枝杆菌生长，将培养基冷藏保存，报告省参比实验室，待其收取。 报 告 方 式 分枝杆菌培养阴性： 斜面无菌落生长 分枝杆菌培养阳性（1+）： 菌落生长占斜面面积的1/4 分枝杆菌培养阳性（2+）： 菌落生长占斜面面积的1/2 分枝杆菌培养阳性（3+）： 菌落生长占斜面面积的3/4 分枝杆菌培养阳性（4+）： 菌落生长布满整个斜面 菌落生长不足斜面面积1/4者，报实际菌落数。 实验室序号 户号及个号 姓名 性别 年龄 标本号 标本性状 涂片日期 涂片结果 培养日期 培 养 结 果 备注 3天 1周 2周 3周 4周 5周 6周 7周 8周 ? ? ? ? ? 1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 3 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 结果报告的注意事项： 必须记录生长过程,不得只记录最终结果 不得打开培养管进行操作 发现可疑分枝杆菌生长时尽快送药敏试验室 阴性培养管也要高压后丢弃 培养的质量控制： 培训和预培养 人员、房间、设备固定 培养基统一提供 涡旋振荡 1分钟 痰标本中加入 1-2倍体积 4%NaOH 分别接种0.1ml 前处理液至2 只培养基斜面 第3天、7天、此后每周 观察一次直至第九周, 记录菌落生长和污染 置37C温 箱培养 室温静置 15分钟 4 3 2 5 6 1 * *