铜绿假单胞菌耐药相关基因检测及临床意义.pptVIP

国外铜绿假单胞菌对IPM耐药情况 拉丁美洲抗生素监测组资料： Pa对IPM敏感率从1997年的77.1%降至2001年62.2%。 Patzer等报道：1986-1992年 IMPRPa分离率1.8% 1994-1996年 IMPRPa分离率2.6% 2001年 IMPRPa分离率19.3% 铜绿假单胞菌耐药机制 产生抗生素灭活酶或修饰酶 β -内酰胺酶 氨基糖苷类修饰酶 β-内酰胺酶 Pa存在固有耐药，多采用羧基及酰胺类青霉素、三代头孢菌素和碳青酶烯类β-内酰胺酶抗生素治疗 广谱β-内酰胺酶 ESBLs AmpC 碳青霉烯酶 TEM 来源：希腊1名叫Temoniera的病人血培养中分离到的大肠埃希菌中发现并得名 TEM命名已至TEM-119型 TEM型ESBLs主要从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中发现，其他肠杆菌科和Pa中也有发现 SHV 来源SHV型ESBLs是在广谱酶SHV-1型基因序列的基础上由一至数十个氨基酸的密码子突变而成 如今SHV命名已至SHV-45型 SHV型ESBLs主要从肺炎克雷伯菌中发现，此外，差异枸橼酸杆菌、大肠埃希菌和Pa中也有发现 OXA D类β-内酰胺酶，主要水解苯唑西林，已发现40余种OXA型β-内酰胺酶中有14种属ESBLs，它们分别是OXA-1、2、10、11、14～19、28、31、32、35。其中OXA-10曾命名为PSE-2。 OXA-23～OXA-27常见于不动杆菌，国外已在Pa中发现多种OXA型酶基因，国内相关报道较少，蒋晓飞等曾报道在8株多重耐药Pa中检出blaoxa-10型基因（同时还存在blaveb-1基因），诸葛青云等从28株耐亚胺培南Pa中检出1株blaoxa-10型基因。 VEB VEB型ESBLs是从越南大肠埃希菌中发现，后来有从来源同一病人的Pa中检出。 该酶介导高水平耐头孢他啶和氨曲南，对克拉维酸敏感。 blaVEB-1基因是首个具有基因盒特征的A类超广谱β-内酰胺酶基因，提示能在不同菌种中扩散 。 CARB CARB基因最早于1981年在Pa中发现，近年又在不动杆菌、弧菌属、奇异变形杆菌中检出，已发现CARB1-9型9个亚型。 CARB基因编码产生羧苄西林酶，为β-内酰胺酶Bush分类中的2c组，有研究报道：哌拉西林的抗菌活性更多的受CARB基因编码产生的羧苄西林酶影响。 PER PER型ESBLs主要从铜绿假单胞菌和不动杆菌中检出，属于Ambler分子结构分类的A类酶，按Bush分类归于2be组，在土耳其流行最显著。 PER共有2种：PER-1最初出现于Pa中，为染色体基因编码，随后发现可被细菌质粒携带； PER-2分离于肠杆菌科细菌如伤寒沙门菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌等以及Pa，为质粒介导。 GES A类酶是青霉素酶，对亚胺培南的水解活性强于美罗培南，可引起青霉素类、氨曲南和碳青霉烯类耐药，第三代头孢菌素敏感，他唑巴坦、克拉维酸可以抑制此类酶，主要见于一些肠杆菌科细菌以及肺炎克雷伯菌。 GES-1基因型为超广谱β-内酰胺酶，GES-2基因型仅在氨基酸密码子的第170位由Gly→Asp所致。 第一株GES-2型Pa分离自南非医院感染患者，南非在一次由产GES-2型酶的铜绿假单胞菌引起的爆发流行的死亡率达62.5%。酶动力学研究显示：GES-2型酶对β-内酰胺酶抑制剂不敏感，对亚胺培南的催化水解效能高于GES-1型酶100倍。 ? 自1988年发现由质粒介导AmpC酶，此类酶呈持续高水平表达，可通过转化、接合等方式转移给其他菌种，传播迅速。 ? 质粒型AmpC酶的基因型有LAT、CMY、BIL、MIR、ACT、MOX、FOX、ACC、DHA等20种。 外膜通透性下降 Pa外膜通透性差：仅为Ecoil的1-8%。 仅存在低效率的微孔蛋白C、D、E1。形成的小孔道只允许小分子糖类跨膜扩散。 Pa LPS分子有6-7条脂肪酸链相互共价连接，使膜的流动性非常低，对药物屏障作用十分强。 OprF：外膜由OprF形成大通道，但OprF的拷贝数较低或仅存在小孔道，在抗生素经特殊通道扩散通过外膜屏障时，小通道因突变造成通透性减低或丢失成为重要耐药机制。 OprD分为OprD1和OprD2，与IPM耐药有关的是OprD2。 OprD2是孔道小分子的IPM选择性快速进入菌体的特异通道，是Pa外膜中惟一有助于抗生素通透的孔蛋白，具有配体特异性，其他β -内酰胺抗生素均不能通过。因此β -内酰胺抗生素和IPM无交叉耐药。 细菌生物膜亟待解决的问题： 细菌生物膜形成的遗传物质基础 细菌生物膜耐药机理，