生存素在类风湿关节炎滑膜组织中表达的临床意义.pptVIP

讨 论 1.RA是以滑膜增生、侵润为主要病理改变。 2. RA的滑膜细胞存在异常的凋亡过程 　?滑膜组织中细胞凋亡频率减低 　 ?衬里下层成纤维细胞的凋亡率为3% 　 ?衬里层细胞几乎无凋亡迹象 ３.滑膜细胞凋亡异常与相关分子表达异常有关 ---- p53、Fas、FasL、Bcl-2家族等 * * 川北医学院附属医院检验科 生存素在类风湿关节炎滑膜组织中表达的临床意义 杨明辉 郭晓兰 唐中 研究背景 类风湿关节炎为常见致残性关节疾患。 病理特点为滑膜类似肿瘤增生，导致关节破坏。 滑膜增生的分子基础为细胞凋亡异常。 生存素（survivin）是凋亡抑制因子家族成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子，在肿瘤中有高表达，在终末分化的成年组织中不表达。 Survivin Survivin 　　探讨凋亡抑制蛋白生存素（Survivin) 在RA滑膜细胞中的表达情况，及初步探讨凋亡抑制蛋白生存素与RA滑膜细胞凋亡的关系。 研究目的 标本来源： RA患者15例（有关节积液者13例）。 骨关节炎（OA）患者8例。 主要试剂： 兔抗人survivin抗体购自美国Bio公司 抗兔浓缩型S-P免疫组化检测试剂盒 及AEC染色试剂盒购自华美。 研究方法 滑膜细胞的分离与培养 滑膜组织 剪切成小碎块 加重组胶原酶，37℃摇床消化24小时 100目尼龙网过滤未消化组织 离心获取细胞后，洗3遍，行台盼兰染色活细胞计数 加DMEM培养液培养，实验采用P2和P3代细胞做细胞贴片备用 免疫组织化学法检测(AEC染色) 滑膜细胞贴片或滑膜组织冰冻切片 冰丙酮固定15分钟后洗涤，0.1%TritonX-100透膜 洗涤，0.3%H2O2去内源性过氧化物酶 洗涤，3%BSA封闭 加1:100稀释兔抗人survivin抗体4 ℃过夜 洗涤，加1:50稀释生物素化二抗37 ℃30分钟 洗涤，加链霉亲和素抗体37 ℃30分钟 洗涤，AEC显色，镜检，照像 结 果 图1. survivin在RA滑膜细胞中的表达 图2. survivin在RA滑膜细胞中的表达 图3. survivin在RA滑膜组织中的表达 图4. survivin在OA 滑膜组织中的表达