硕士论文答辩 嵌合环境抑制供者反应性记忆性T细胞并诱导供者特异性耐受的研究.pptVIP

Company Logo Company LOGO 嵌合环境抑制供者反应性记忆性T细胞并诱导供者特异性耐受的研究 答 辩 人：兰天舒 指导教师：齐忠权 教授 嵌 合 体 1945年,遗传学家 Ray Owen报道了具有共同血运的异卵双生的小牛同时具有本身细胞及对方细胞，这种状态被称为“嵌合 ”。嵌合体间进行皮肤移植并不发生排斥反应，而来自第三方的皮肤则很快被排斥。 放化疗 免疫抑制 共刺激信 号的阻断 anti-CD154 嵌合体诱导耐受常用的方法 骨髓移植 (BMTx) 供者特异 性输注 （DST） 强毒性、 受者免疫力低下 需大量的骨髓细胞 DST中供者细胞免疫原性强易被排斥或引起移植物抗宿主病 CD4+ T CD8+ T 排斥反应发生的阈值 时 间 T 细胞应答和存活相关因素 器官移植中的记忆性T细胞（Tm） 初次器官移植、多次输血、妊娠，病原体感染 CD8+ Tm CD4+ Tm 移植物 钙调蛋白抑制剂 常规共刺激阻断剂 效果较差 研 究 目 的 供者特异性耐受 Yamazaki. Am J Transplant 2007 抑制效应性T细胞介导的排斥反应 anti-CD154 骨髓移植 (BMTx) 供者特异 性输注 （DST） 抑制记忆性T细胞介导的加速性排斥 低毒、维持嵌合、 较高水平的调节性T细胞（Treg） 实验设计 Tm -11 -8 -4 0 4 DST BMTx anti-CD154 HTx 处理时间 （天） Tm数量和功能 免疫调节水平 FCM/qRT-PCR: Treg FCM: Tm 移植物存活情况 病理学检测 qRT-PCR: IL-2、IFN-g 移植物存活100天时检测 MLR MLC ELISA: TGFβ, IL-10 嵌合率 FCM BALB/c B6 心脏移植（HTx） DST /BMTx 实验分组 HTx（供体） 耐受诱导方法 DST anti-CD154 BMTx 阳性对照组 B6 - Iso - 阴性对照组 BALB/c - Iso - Tolerance组 B6 + + + C3H 组 C3H + + + Tol/CD4+ Tm组 B6 + + + Tol/CD8+ Tm组 B6 + + + 实验分组 注：各组均以BALB/c为受体。耐受诱导时均以B6为供体。 结果1：记忆性T细胞对移植物存活时间的影响 实验分组 心脏移植物存活天数 (中位平均存活时间) 阳性对照 7 7 7 8 8 10 (7.5) C3H组 8 9 10 15 15 21 (13) Tolerance组 100 100 100 100 100 100 (100 ) Tol /CD4+ Tm组 100 100 100 100 100 100 (100 ) Tol /CD8+ Tm组 100 100 100 100 100 100 (100 ) B 阳性对照 Tolerance Tol/CD4+ Tm Tol/CD8+ Tm Masson 100× HE 400× A 阳性对照 Tolerance Tol/CD4+ Tm Tol/CD8+ Tm 结果2：记忆性T细胞对移植物的影响 结果3：记忆性T细胞对嵌合水平的影响 Tolerance Tol/CD4+ Tm Tol/CD8+ Tm FITC H-2Kb Events 3.59±0.96% 0.17±0.08% 3.94±1.04% A C B MLC PE-CD44 (CD4 gated) (CD8 gated) PECy5-CD62L Tolerance Tol/CD4+ Tm Tol/CD8+ Tm Tolerance MLR 细胞死亡率 结果4：记忆性T细胞的数量和功能检测 31.24±0.51% 31.15±1.23% 32.92±2.62% 34.10±1.45% B 基因相对表达量 结果5：调节性T细胞的水平 A C 阳性对照 Tolerance FITC-CD4 (CD4 gated) PE-Foxp3 Tol/CD4+ Tm Tol/CD8+ Tm 图A 心脏移植物中Foxp3 mRNA表达水平 图B 脾脏中CD4+ Foxp3+ T细胞占CD4+ T细胞的比例 10.93±1.15% 10.49±