四川省乙肝标志物ELISA实验操作规范.pptVIP

四川省乙肝标志物ELISA实验操作规范 1. 样品的采集、运输和保存1.1 样品的采集和处理1.1.2 血清样品采集和处理1.1.3 抗凝血样品采集和处理建议使用全自动酶联免疫分析系统的实验室使用血浆样本。 1.2 样品的保存1.3 样品的运送建议采用WHO提出的三级包装系统： 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。血清和血浆样品应在2?8℃条件下由专人运送。 2.实验操作2.1准备试剂ELISA实验的水质要求达到国家实验室用水一级水标准（GB6682-92） 2.2 加样本及反应试剂2.3 温育2.3.1 保证在设定的温度下有足够的反应时间2.3.2 “边缘效应”的排除排除“边缘效应”可提高测定的重复性。 2.4 洗板严格按照试剂盒要求配制洗液，实验室应使用洗板机进行洗板，洗板机的相关设定应保证适当的注液速度、注液量、浸泡时间、吸液速度和洗板次数，液体残留应尽量少，设定完毕应用空板测试，洗板效果要经过评价。 评价实验可按如下方法进行：选择4×8 HBsAg ELISA包被板条，每2×8孔分别加入相同一份弱阳性标本和一份阴性样本，按试剂盒说明加入酶结合物并完成温育后， 洗板孔时按第1排4 孔洗1次、第2排4孔洗2次、第3排4孔洗3次……直至第8排4孔洗8次，加底物显色测定，如洗3次后，显色不再改变，即洗3次的板孔比色测定与4次、5次洗板的板孔的吸光度等相同，阳性／阴性值保持最大不变，则可以认定该实验室所用洗板机3次洗板即可达到要求。 2.5 显色2.6 比色2.6.1比色测定时，要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。 2.6.2 双波长比色测定具有能排除由微孔板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点， 2.7 结果判定临床乙肝标志物ELISA实验为定性测定，结果分别用“阳性”和“阴性”来表示。阴性对照和阴性质控血清检测结果必须为阴性，阳性对照检测结果必须为阳性。 ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值（cut-off），而不能以卫生部临床检验中心供应的弱阳性定值质控血清作为判断结果标准。 乙肝标志物ELISA定性测定结果判定中两个重要缩写的定义：（1）S/CO：其中S为sample（样本）或specimen（标本）的简写，表示的是标本测定的吸光度值，CO为cut-off值的简写。除竞争抑制法外，其他ELISA定性测定模式中，当S/CO值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性。 （2）S／N或P／N：其中S同（1），N为negative（阴性对照）的简写，P为patient（患者）的简写。较早的试剂盒很多都使用S／N或P／N≥2.1为阳性判定标准，现仍有一些试剂盒使用这种方式。 2.8 复检、结果报告及解释2.8.1 实验室应对有疑问的结果进行复检。 2.8.2 实验结果应满足质控规则的要求，实验室质量管理程序得到执行，实验室应作出实验成立的判断，方可发出检验报告。报告必须报告“阳性”或“阴性”，同时报告S/CO值。2.8.3 实验室有义务接受临床医师对实验方法学的咨询。 3.复检标准及复检结果的判断3.1 复检标准 复检主要是针对有疑问或少见模式的检测结果进行重新实验。 3.1.1 对弱阳性结果进行复检 建议对如下弱阳性结果进行复检：HBsAg 1≤S/CO10Anti-HBs 1≤S/CO2HBeAg 1≤S/CO2Anti-HBe 0.3≤S/CO1Anti-HBc 0.3≤S/CO1 3.1.2 对少见模式结果进行复检建议对如下少见模式结果进行复检： 注：“√”表示需要复检；“×”表示不需要复检；“*”表示除原倍血清（或血浆）复检外，同时还需稀释（可使用生理盐水，至少1:100稀释）复检。 3.1.3 对复检结果的判断 对复查结果的判断应结合比色结果和组合模式进行。初、复检结果一致，报告初检结果；初、复检结果不一致，但均接近CO值，可结合其他指标报告结果，或再次复检，以两次一致结果报告； 对体检标本，单独的Anti-HBe（或兼Anti-HBs）或Anti-HBc（或兼A