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染色体显带技术: 是经物理、化学因素处理后,再用染料对染色体进行分化染色,使其呈现特定的深浅不同带纹(band)的方法,于1968年由瑞典人Casperson首先建立。显带技术可分为两大类,一类是产生的染色带分布在整个染色体的长度上,如:G、Q和R带,另一类是局部性的显带,它只能使少数特定的区域显带,如C、Cd、T和N带。 Q带:喹丫因染色后,紫外照射下的明暗带(富含AT的明带,富含GC的暗带);G带:Giemsa染料染色后所呈现的染色体区带;R带:是中期染色体经碱性磷酸盐处理,丫啶橙或Giemsa染色后所呈现的带型,一般与G带正好相反;C带:显示着丝粒结构异染色质及其它染色体区段的异染色质。T带:是染色体端粒部位经丫啶橙染色后呈现的区带;N带:Ag-As染色,主要染核仁组织者区域的酸性蛋白。 1975年建立了染色体高分辨显带技术。 染色体微切割和分子克隆技术。 * * 第三节 染色体 一、中期染色体的形态结构 同一物种的染色体数目是相对稳定的,性细胞染色体为单倍体(haploid),体细胞为2倍体(diploid),还有一些物种的染色体成倍增加成为4n、6n、8n等,称为多倍体。同一个体的体细胞并非都是2倍体,如大鼠肝细胞有4n、8n、16n等多倍体细胞,果蝇卵巢滋养细胞表现为2n、4n、8n、16n、32n、64n、128n等不同倍性。 染色体的数目因物种而异,如人类2n=46,黑猩猩2n=48,果蝇2n=8,家蚕2n=56,小麦2n=42,。在植物中染色体最少的仅2对染色体,最多的物种可达400-600对。在动物中染色体最少的是一种介壳虫的雄虫仅有两条染色体,而另一极端是一种灰蝶有217-223对染色体。 着丝粒在染色体上的位置: 中着丝粒染色体 (Metacentric chromosome) 近中着丝粒染色体 (Submetacentric chromosome) 近端着丝粒染色体 (Arocentric chromosome) 端着丝粒染色体 (Telocentric chromosome) 染色体的各部分名称 染色体(Chromosome) 姊妹染色单体(Sister chromatid) 根据着丝粒位置进行的染色体分类图示 1、着丝粒与动粒(也称着丝点,kenetoche) 着丝粒和动粒(着丝点)是两个不同的概念,前者指中期染色单体相互联系在一起的特殊部位;后者指主缢痕处两个染色单体外侧表层部位的特殊结构,它与仿锤丝微管相接触。 着丝粒含3个结构域,即:动粒结构域(kinetochore domain)、中央结构域(central domain)和配对结构域(paring domain)。 动粒结构域位于着丝粒的表面,由外板(outer plate)、内板(inner plate)、中间区(interzone)和围绕外层的纤维冠(fibrous corona)。内外板的电子密度高,中间区电子密度低。内板与中央结构域的着丝粒异染色质结合,外板与微管纤维结合,纤维冠上结合有马达蛋白。 中央结构域位于着丝粒结构域的下方, 是着丝粒区的主体,由高度串联重复的α卫星DNA构成,重复单位171bp,重复2000-3000次,表现为异染色质特性。 配对结构域位于着丝粒结构的内层,中期两条染色单体在此处相互连结,在此区域发现有两类蛋白,一类为内着丝粒蛋白INCENP(inner centromere protein),另一类为染色单体连接蛋白CLIP(chromatid linking protein). 对着丝粒蛋白主要是使用ACA来研究的。ACA是从CREST 综合症病人血清中分离出来的抗着丝粒蛋白的抗体(anticentromere antibodies)。用ACAs发现鉴定出来的CENP主要有6种,即:CENP-A至F,它们都能与一个17bp的DNA模式特异结合,与细胞的分裂及调控密切相关,进化上非常保守。 着丝粒结构区域组织 着丝粒的3个结构域 着丝点结构域 荧光原位杂交显示着丝粒卫星DNA 2、主缢痕(primary constriction) 中期染色体上一个染色较浅而缢缩的部位,主缢痕处有着丝粒,亦称着丝粒区,由于这一区域染色线的螺旋化程序低,DNA含量少,所以染色很浅或不着色。一般动植物的染色体具有一个位置固定的着丝粒(localized contromere),有些生物整个染色体都具有着丝粒活性,称为全着丝粒(holocentromere)如:如蛔虫、线虫、蝶、蛾、蚜虫等。 3、次缢痕(secondary constriction) 除主缢痕外,染色体上第二个呈浅缢缩的部分称
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