WesenBl讲座2012.ppt

* 免疫层析快速检测试纸结构及原理 如图所示：将样本加到S区后，由于层析作用样本会进入B区和B区的金标抗体发生免疫反应，再层析到T线位置时， 如果样本中含有待测抗原则在B区时将同金标抗体结合，金标抗体上的位点将被其占据，再到T位置时就无空余的位点和测试线上的抗原结合，故T线不显色或显色很淡，C线显色，这样得到的是阳性结果。当待测样本中不含抗原时，样本与金标抗体不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的抗原会“捕捉” 金标抗体复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。当无C线时，表示测试无效。 S B T C D 操作步骤 收集菌液离心，用A液处理15min B液终止反应，将处理液加入到样槽内 1 2 样液滴入加样孔后开始计时，5～10分钟左右判定结果 3 Western Blot 技术服务 目标蛋白 – 反应条件？最佳稀释度？ 选择试剂，摸索条件，优化参数 – 两个月？ CoWin解决方案：全套western blot技术服务 客户指定：物种，目标蛋白 客户提供：生物样本 客户得到： 蛋白提取、定量、电泳、转膜、抗体孵育、显色或者发光检测等详 实的实验数据。经过预实验摸索的最佳实验条件。 * 技术服务流程 客户填写信息采集单 康为与客户签订项目定制单 康为按双方签定的定制单进行实验 康为提供实验报告 *  Western Blot具体案例 实验目的： 用Western Blot法检测人细胞样本中OCT蛋白的表达。 信息采集：（客户填写信息采集单） 样本名称、数量（人？大鼠？小鼠？） 检测指标（几个蛋白？蛋白名称？） 其他相关信息 * Western Blot具体案例 服务项目 （目录号） 基本程序 验收标准 时间 （工作日） 样品准备 从样品中提取蛋白并定量（BCA法） 抗原总量 大于设计用量 3天 WB检测 SDS分离胶浓度 根据目的蛋白大小设定 7天 上样量 按蛋白定量结果 确定最适上样量 转膜 方法 半干转 质量 丽春红染色，条带清晰 靶蛋白检测 抗体浓度 以客户指定或说明书 推荐稀释度进行实验 内参蛋白检测 内参抗体 β-actin/GAPDH/其它 总计 2-3周 * 实验报告 实验报告： （向客户提交完整实验报告） 实验材料：（样本、试剂、仪器） 实验方案： 实验结果： 蛋白提取 蛋白定量：BCA蛋白定量标准曲线 蛋白电泳 转膜：丽春红染色图 Western blot ：荧光成像图 * 实验报告 蛋白定量：BCA蛋白定量标准曲线 * 转膜：丽春红染色图 Western blot ：荧光成像图 Western Blot 技术服务优势 为客户提供专业的技术服务：化学发光仪器成像，原位生成Marker，有效减少人为因素，实验结果更真实可信。 经过预实验摸索最佳实验条件，待客户认可结果后开始正式实验，更好的满足客户要求。 2011年承接western blot技术服务检测目标蛋白200余个，样本1500余个，物种包括人、大鼠、小鼠、猪、鸡、鹅、绵羊、酵母、植物、玉米、烟草、拟南芥、番茄等，涉及的组织包括视网膜、肠、肝脏、心脏、肾脏、脑、肺等。 * 北京康为世纪生物技术有限公司 总机：010?????4006-222-360 订购 010618 order@ 技术支持 010615/616 support@ 市场部 010628 marketing@ * * * 北京康为世纪生物科技有限公司 Beijing CoWin Biotech Co.,Ltd. 主要内容 Western Blot 技术原理与实验流程 康为Western Blot产品与技术服务 * * Western Blot定义 Western Blot又称免疫印迹，是指将蛋白样品转移到固相 载体上，而后利用相应的抗体来检测目的蛋白的一种方法。 Western Blot 应用： 研究检测样品中特异性蛋白质的存在 细胞中特异蛋白质的半定量分析 蛋白质分子的相互作用研究 Western Blot实验流程 * Step4 转膜 Step6 免疫反应 Step7 显色或发光 Step2 蛋白定量 Step3 SDSStep1 蛋白提取