经管类微生物学概论.ppt

微生物學概論Microbiolgy 微生物學（microbiology） 源自希臘字，mikros （微小） bios （生命） logos （科學） 意指_研究微小生命之科學 微生物的發現 法國人巴斯得（Pasteur，1822～1895） 推翻自然發生說（spontaneous generation） 提倡生物發生說（biogenesis） 確認酒精發酵與酵母的關係、殺菌問題 及抗體（antibodies）在寄主內產生，在病 原微生物上產生了一個新紀元，故世人尊 稱為微生物之父 微生物的五大類 ?細菌(原核生物 )? 真菌界(酵母菌、黴菌、蕈類等) 藻類 病毒(介於生物與無生物)? 原生蟲單細胞 微生物的命名 微生物以瑞典植物學家林奈的二名法 (以拉丁文命名兼具屬與種名) 學名(屬名 + 種名) 大腸桿菌— Escherichia coli 乳酸菌—Lactobacillus brevis 細菌的形狀 球菌 桿菌 弧菌 螺旋菌 分支細菌 細菌之菌落外觀 微生物的顯微技術 微生物的生長 微生物的培養與生長  影響微生物之物理環境主要如下： 溫度 pH 空氣 測量細菌生長之方法 1. 顯微鏡計數（direct count）例：血球計數盤 2.乾菌重（dry cell weight） 3.濁度測定（turbidity measurement） 4.活菌計數法（viable counting） 測量細菌生長之方法(一) 1. 直接顯微鏡計數： 以特殊計算盤（counting chamber）計數微量菌液 ，再以數學方法求取總菌數。 4大格細胞總數 x 104 / 4 = 細胞數/ml 測量細菌生長之方法(二) 2.乾菌重（dry cell weight） 菌體濃度是以乾菌重表示，培養過程中取出培養菌液以0.45um慮膜過濾（洗菌），將慮膜至於60~70℃烘箱烘乾至恆重，以量測其乾菌重。 培養過程中菌體濃度（g/L）對時間作圖，為菌體濃度曲線（菌體生長曲線） 測量細菌生長之方法(三) 3.濁度測定（turbidity measurement） ： 利用光電比色計（Photospectrometer）以590~600nm的波長，通過含有細菌之懸浮液，測其吸收率或折射率。 先做出標準曲線後，可依照此標準曲線推算出的濃度，繼而推算出細菌濃度與菌數。 優點:快速方便 缺點:死菌、活菌一同測量 測量細菌生長之方法(四) 4.活菌計數法（viable counting）： 利用已知體積之無菌水作為稀釋劑，將菌液連續稀釋後， 再以塗抹法(spread plate)，將稀釋之細菌懸浮液塗佈或傾 注於適當之營養培養基上，經培養過夜，計數菌落數目， 再乘以稀釋倍數，便可得到總菌數。 優點：測得皆活菌 準確度高 細菌之保存方法 短期保存方法 (SHORT-TERM METHODS) 繼代培養 (Subculturing) 礦物油浸泡保存 (Immersing in mineral oil) 長期保存方法 (LONG-TERM METHOD) 超低溫冷凍保存 (Ultra-freezing) 冷凍乾燥保存法(Lyophilization) 繼代培養 (Subculturing) 必須考慮三個條件： (1)適合的保存培養基 (2)理想的保存溫度 (室溫或4℃) (3)重新接種活化的頻率 優點: 使用方法簡單 不需要特別設備 缺點: 菌株易遭受污染 生理活性降低 可能挑取到突變菌株 礦物油浸泡保存 (Immersing in mineral oil) 礦物油滅菌方法-乾熱滅菌( 170℃ 1 ~ 2 小時)而非以滅菌釜滅菌 步驟-固態或液態培養基培養菌株，達生長期後，加入已滅菌的礦物油，然後保存於 4℃，礦物油的液面必須蓋過培養基頂端約 2 公分 目的為防止水分散失，並降低菌株生長及代謝的速率 優點: 簡單又便宜且保存期限達數月或數年 缺點: 添加礦物油的過程極為費時費力 (超)低溫冷凍保存 (Ultra-freezing) 低溫保存:-20℃~-135 ℃(2~3年) 超低溫保存:-150 ℃~-196 ℃(10年以上) 保護劑:甘油5~10％ —溼熱滅菌 二甲亞砜(DMSO) —過濾除菌 冷凍方式:以1min降1 ℃為原則 活化方式:快速活化 時間60s以內 慢凍快解 (超)低溫冷凍保存 (