微生物染色液配制及染色法21美蓝染色法211吕氏碱.pdf

中国试剂网 2.5.48 微生物染色液配制及染色法 2.1 美蓝染色法 2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液 美蓝 0.3g 95%乙醇 30mL 0.01%氢氧化钾溶液 100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。 2.1.2 染色法 将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染 1～3min，水洗，待干，镜检。 2.1.3 结果 菌体呈蓝色。 2.2 革兰氏染色法 2.2.1 结晶紫染色液 结晶紫 1g 95%乙醇 20mL 1%草酸铵水溶液 80mL 将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。 2.2.2 革兰氏碘液 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300mL 将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸 馏水至 300mL 。 2.2.3 沙黄复染液 沙黄 0.25g 95%乙醇 10mL 蒸馏水 90mL 将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。 中国试剂网 2.5.48 2.2.4 染色法 2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染 1min，水洗。 2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用 1min，水洗。 2.2.4.3 滴加 95%乙醇脱色，约 30s ；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用 乙醇滴满整个涂片，脱色 10s。 2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染 1min。水洗，待干，镜检。 2.2.5 结果 革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。 注：亦可用 1：10 稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需 10s。 2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法) 2.3.1 石炭酸品红染色液 碱性品红 0.3g 95%乙醇 10mL 5%酚水溶液 90mL 将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。 2.3.2 3%盐酸－乙醇 浓盐酸 3mL 95%乙醇 97mL 2.3.3 复染液 吕氏碱性美蓝染色液。 2.3.4 染色法 2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气 出现，但切 不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染 5min，倾去染 液，水洗。 2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定， 一般为 1～3min)，水洗。 2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染 30s～1min，水洗，待干，镜检。 2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。 中国试剂网 2.5.48 2.4 柯氏染色法 2.4.1 染色液 2.4.1.1 0.5%沙黄液。 2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。 2.4.2 染色法 2.4.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加 0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约 2～ 3min，水洗。 2.4.2.2 滴加 0.5%孔雀绿液，复染 40～50s 。水洗，待干，镜检。 2.4.3 结果 布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。 2.5 奥尔特氏荚膜染色法 2.5.1 染色液 沙黄 3g 蒸馏水 100mL 用乳钵研磨溶解。 2.5.2 染色法 将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染 3min 。水洗， 待干，镜检。 2.5.3 结果 炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。 2.6 瑞氏染色法 2.6