手性拆分介绍.ppt

对映体拆分方法介绍 杨永健 上海市药品检验所 现状 目前在使用的药物中，手性化合物约占39%，因此对于手性药物的拆分法的研究越来越受到人们的重视，已经成为新的手性药物研制开发过程中不可缺少的一个组成部分。 手性药物的开发成为延伸专利保护的一种有效方法。 对映体拆分方法 色谱法（GC、HPLC） 高效毛细管电泳（HPCE） 色谱法拆分手性对映体的大事记 1939 Henderson和Rule：以乳糖为填料拆分了樟脑衍生物的消旋体 1952 Dalgliesh：提出了纸色谱中氨基酸拆分的三点作用原则 1966 Gil-Av等：采用GC直接拆分对映异构体 1971 Davankov和Rogozhin：提出手性配体交换色谱法 1972 Wuff和Sarhan：制备了用于GC分析的酶类似物的聚合物 1973 Hesse和Hagel：制备了三醋酸纤维素 1973 Stewart和Doherty：用琼脂糖键合牛血清白蛋白(BSA)为手性 固定相进行手性拆分 1974 Blaschke：从光学活性单体合成了用于LC拆分的手性聚合物 1975 Cram等：建立了手性冠醚的主-客体色谱法 1979 Pirkle和House：合成了第一个硅胶键合的手性固定相并应用 于LC拆分 色谱法拆分手性对映体的大事记 1979 Okamoto等：合成了用于LC拆分的螺旋状聚合物 1982 Allemark等：将琼脂糖键合牛血清白蛋白(BSA)手性固定相用 于LC手性拆分 1983 Hermansson：将α1-酸性糖蛋白键合硅胶用于手性拆分 1984 Armstrong和Demond：制备了环糊精键合硅胶 1994 Armstrong：制备了键合大环内酯类抗生素的填料 HPLC拆分方法 直接法（CSP，CMPA） 间接法（CDR） 手性流动相添加剂法 手性包含复合 手性配合交换 手性离子对 动态手性固定相 手性氢键试剂 蛋白质复合物 手性诱导吸附 手性包含复合 CD对疏水性和亲水性药物对映体都具有很强的包含作用，并使包含物理化性质发生改变。对映体分子进入CD手性空腔后即发生主-客反应（如各种疏水性、氢键反应等）而被拆分。CD包含物在溶液中平衡相对较快且可逆，在较宽的pH范围内CD稳定，不干扰UV检测且无毒性，但CD在甲醇中的溶解度较小。 手性包含复合 已用于分离氨基酸及其衍生物、巴比妥类、氯胺酮、苯妥英代谢物、叔丁喘宁、美芬妥因及其代谢物、哌嗪类镇痛药、甲基炔诺酮、伪麻黄碱、17-酮甾体、去甲羟基安定等。 固定相常为ODS、CN、C8、苯基、硅胶等。 检测手段多为UV和ECD。 手性包含复合法应用 手性配合交换 1971年Davankov将手性金属配合剂加入HPLC流动相中，形成三元非对映体配合。由于它们结构稳定性和能量的差异，并与固定相发生立体选择性吸引或排斥反应，使两对映体得以分离。 手性配合交换 常用的手性配合试剂多为氨基酸及其衍生物，如L-脯氨酸、L-苯丙氨酸等。 配位金属有Cu2+、Zn2+、Ni2+、Cd2+等。 已用于分离氧氟沙星、氨基酸及其衍生物、多巴胺等。 手性配合交换应用 手性离子对 基本原理是：在低极性的有机流动相中，对映分子与手性离子对试剂之间产生静电，氢键或疏水性反应生成非对映体离子对。两种非对映体离子对具有不同的稳定性，并且在有机相与固定相间的分配行为也有差异，因而得以分离。 手性离子对 常用的手性反离子有奎宁、奎尼丁、D-樟脑磺酸、N-苯甲酰氧基羰基-甘氨酰-L-脯氨酸等。 被分离的药物有：β-阻滞剂、奎宁、奎尼丁、羧酸、磺酸、甲氟嗪、苯丙酰苯心安等。 固定相为硅胶、CN、Diol等。 一般采用正相色谱法。 动态手性固定相 CD的衍生物、(2R,3R)-双-正丁基酒石酸等可以少量强烈吸附于固体填充剂表面上，使固定相表面手性化，形成的动态固定相在洗脱过程中与溶质分子相互作用，对映体按与覆盖于固定相表面的添加剂之间的作用力强弱而被分离。 手性氢键试剂 经修饰的氨基酸，如N-乙酰基-L-缬氨酸-四丁胺、(R,R)-N,N‘-双异丙基酒石酸酰胺等，作为手性流动相添加剂。药物对映体基于分子间的弱作用力氢键而被分离，并需使用低极性的有机流动相。 在色谱分析前需将一些极性基团如-NH2、-OH衍生化。 已用于分离巴比妥类、氨基酸及其衍生物等。 蛋白质复合物 蛋白质类(BSA、α1-AGP）作为手性添加剂，可通过疏水性、静电、氢键和电荷转移等反应，形成蛋白质-溶质复合物分离药物对映体。 常用的固定相为经修饰的中等粒度的硅胶，如Diol。 蛋白质复合物 已用于分离氨基酸、羧酸和疏水性胺类等。 常用的流动相由缓冲液与有机改性剂组成。