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两种聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法对SRAP标记的影响 导读：就爱阅读网友为您分享以下“两种聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法对SRAP标记的影响”资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92的支持! 江西农业学报 　 2008, 20(12) :40~41Acta Agriculturae J iangxi 两种聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法对 SRAP 标记的影响 张妤艳 , 马瑞娟 , 俞明亮 , 蔡志翔 　 　 收稿日期 :2008-09-24 基金项目 :江苏省科技基础建设计划项目 (BM2008008) ; 国家 “ 863” 计划项目。 作者简介 :张妤艳 (1979-) , 女 , 江苏无锡人 , 博士研究生 , 助理研究员 , 主要从事桃育种与分子生物学方面的研究。 (江苏省农业科学院 园艺研究所 , 江苏 南京 210014) 摘 　 要 :应用 S RAP 标记对桃进行标记 , 比较了两种聚丙烯酰胺凝胶的银染方法。 染色结果显示 , 弱碱银染法背景颜色 浅 , 灵敏度较高。 强碱银染法对条带的鉴别力稍差 , 但因省时省力 , 适于分子标记辅助选择 (MAS ) 大规模引物筛选时的染色。 关键词 :银染法 ; 聚丙烯酰胺电泳 ; S RAP; 桃 中图分类号 :Q78　 文献标识码 :A 　 文章编号 :1001-8581(2008) 12-0040-02 Effects of Two Colora ti on M ethods i n Polyacryl am i de Gel Electrophoresis Syste m on D of Z HANG Yu -yan, MA Rui -juan, Y U -C (I nstitute of Horticulture, J iangsu Acade my of China ) Abstract:Sixty S RAP p ri m ers fr o m peach were t o on methods of detecting S RAPs by poly 2acryla m ide gel electr ophoresis syste m. differences bet w een t w o silver -stainingmethods . Silver -staining detecti on in str and adap tability es pecially in MAS than traditi onal method in alkalescent situati on on of ment . Key words:Silver -Polyacryla m ide gel electr ophoresis ; S RAP; Peach 　　 银染法是一种重要的 DNA 染色法。 其原理是利用 银离子可与核苷酸结合 , 在碱性环境下甲醛能使银离子 还原从而使凝胶中的 DNA 得以显带。 由于银染可以检 测到低至纳克级的核酸 , 具有可与同位素相比拟的高灵 敏度 [1] , 与常用的染色剂溴化乙锭相比 , 具有无染色体畸 变、 可使单链核酸着色的特点 , 因而得到广泛应用。 尽管 文献报道的银染方法很多 , 但操作差异较大 , 使初次使用 者难以从中做出最佳选择。本研究选择常用的 Bas 2 sa m [2] 和 Sanguinetti [3] 的银染法 , 略作改进 , 总结了它们 各自的特点 , 旨在为初用者选择方法时提供参考。 1　 材料和方法 1. 1　 试验材料 　 利用桃矮化品种 A20和乔化品种 99-12杂交获得的 F 1个体以及其亲本作为试验材料。 叶片 于春季取自江苏省农业科学院国家桃资源圃。 60对 SRAP 引物根据 L i and Quir os 公布的引物序列 [4] , 由上 海英骏生物技术有限公司合成。 1. 2　 DNA 提取及近等基因池的构建 　 采用 S DS 法 [5] 。 经 1. 0%琼脂糖凝胶电泳检测后 , 将 DNA 稀释至 50ng/μL, -20℃ 贮存备用。 根据 BS A 法原理 , 取杂交后植株表现为矮化与乔化 的个体各 10株 , 将其 DNA 分别等量混合 , 组成矮化基因 池与乔化基因池。 1. 3　 PCR 扩增体系和电泳方法 　 20 μL 反应体系 :模板 DNA 50ng,MgCl 21. 5mmol/L,dNTP 200μmol/L,上下引 物各 0. 4μmol/L,TaqDNA 聚合酶 1. 50U, 以灭菌双蒸水 补齐至 20μL 。 PCR 反应在 B iometra 的 PCR 仪中进行 , 程序 :94 预变性 5m in, 反应前 5个循环在 94 1m in,