9《仪器分析》液相色谱分析.ppt

（2）固定相 通常称为离子交换剂或者离子交换填料。根据交换剂的性质，有用于交换阳离子的阳离子交换剂和交换阴离子的阴离子交换剂。根据交换基团不同，分为强酸性阳离子、弱酸性阳离子、强碱性阴离子、弱碱性阴离子。 离子交换树脂 应用最广泛的离子交换树脂是苯乙烯型，它是在苯乙烯树脂上引入离子交换基团。 硅胶化学键合离子交换剂 为了克服离子交换剂树脂溶涨和被压缩的缺点，制备了各种硅胶键合离子交换剂。 （3）流动相 盐类缓冲溶液，影响保留值的因素： pH 缓冲剂类型（淋洗离子电荷） 离子强度 有机溶剂添加剂 配位剂：配体交换反应 RM-L + X —— RM-X + L （4）离子色谱法 电导检测器是离子交换色谱常用的检测器，然而，离子交换色谱淋洗液很多是强电解质，其电导比待测溶质高两个数量级，完全掩盖了待测离子信号。 大多数无机离子没有紫外吸收，检测困难是妨碍离子交换色谱发展和应用的重要原因之一。1975年，Small等提出的离子色谱很好解决了这个问题。 双柱离子色谱（抑制离子色谱） 分离柱采用低容量交换剂，交换柱上分离机理和离子交换色谱相同。抑制柱反应是构成离子色谱高灵敏度个高选择性的重要基础。 分离阳离子，一般用无机酸做淋洗剂，强碱性高容量阴离子交换剂做抑制柱，在抑制柱内产生两个重要反应： R+OH- + H+Cl- ---- R+Cl- + H2O R+OH- + M+Cl- ---- R+Cl- + M+OH- 流动相的无机酸与抑制柱反应生成水而除去，待测阳离子由盐转变成相应的碱。抑制反应的结果不仅降低了淋洗液电导，而且由于OH-的离子淌度是Cl-的2.6倍，同时提高了检测阳离子的灵敏度。 分离阴离子，一般用NaOH或者NaHCO3做淋洗剂，强酸性高容量阳离子交换剂做抑制柱，在抑制柱内产生两个重要反应： R-H+ + Na+OH- ---- R-Na+ + H2O R-H+ + Na+X- ---- R-Na+ + H+X- 淋洗液在抑制柱上反应，淋洗离子变成水或者碳酸（NaHCO3时），使本底电导大大降低。样品离子转变成相应的酸，而且由于H+的离子淌度是Na+的7倍，同时提高了检测阴离子的灵敏度。 由于抑制柱积累了来自流动相的Na+ 或Cl-离子，逐渐丧失抑制能力，必须经常用酸或碱再生。 膜离子抑制器 抑制柱必须再生，寿命短。为了克服这个缺点，采用具有磺酸基或季胺基团的聚苯乙烯多孔纤维制成的离子交换膜管，管内流过洗脱液，管外流过离子交换再生液。 6 尺寸排阻色谱法 （1）原理 按照分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法，也称为凝胶色谱法。 以水溶液为流动相称凝胶过滤色谱（GFC），有机溶剂为流动相称为凝胶渗透色谱（GPC）。 Vs VG Vm 凝胶色谱柱床的体积分布 凝胶色谱柱床总体积VA包括填料骨架体积VG，填料孔穴体积VS和颗粒间体积Vm： VA = VG + VS + Vm VT = VS + Vm 固定相－凝胶色谱填料孔穴中VS的溶剂 流动相－填料颗粒间的体积Vm 中的溶剂 溶剂分子能够扩散进入填料孔穴。如果溶质分子足够小，也可以不同程度地向孔穴内扩散，占据一部分孔穴体积；如果溶质分子体积足够大，则不能扩散进入孔穴，被最先流出。 Ve = Vm + VSa 式中Ve是淋洗体积，即溶质保留体积，VSa是一定分子大小的溶质渗进孔穴所占的体积，是VS的一部分，是溶质分子量的函数。VSa和VS之比定义为分配系数KGPC： 相对分子量校准曲线 以相对分子量对保留体积作图。 A 排除极限 B 全渗透极限 （2）固定相 常用的有无机和有机两类，5-10?m。 。 多孔玻璃或硅胶： 平衡快，耐高温，制造容易，孔径4-250nm。易产生吸附效应，需硅烷化处理。 苯乙烯二乙烯基苯共聚物： 孔径由交联剂二乙烯基苯的量来控制，疏水性，流动相必须是非水溶剂。在交联剂中引入亲水基团，如磺化二乙烯基苯等，可以得到亲水的共聚物。 孔径大小是非常重要的参数，它表明可分离的相对分子量的范围。 （3）流动相 要求：能溶解样品，沸点比柱温高25-50?C，粘度低，与样品折光率相差大。 常用四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基甲酰胺、水等。 尺寸排阻色谱主要应用： 分离蛋白质、核酸等 测定高聚物的相对分子量分布 研究聚合机理 7 分离模式选择与应用 从分子量、水溶性、极性和分子结构