【教程】显微镜下的组织切片的制作.ppt

概述 制片方法的种类：非切片法、切片法 制片方法的一般步骤： 切片法（1）杀死、取材与固定（2）洗涤（3）脱水（4）透明（5）透入（6）包埋（7）切片（8）贴片（9）染色（10）封藏 非切片法（1）整体封藏法（2）涂片法（3）磨片法（4）分离法（浸渍分离法、撕碎法）（5）压碎法 * * 组织切片技术 石蜡切片技术 石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理，使石蜡渗入组织，包埋成蜡块，再把组织蜡块切成极薄的片子，根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学或特殊（如抗原）成份含量的变化。 一、取 材 取材应注意事项： 切取组织应根据需要观察的部位进行选择。 所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层，同时考虑好切面方向。 病理组织除切取病变部位外，还要切取病变和正常组织交界区域，以利观察分析。 切取的组织必须新鲜。 取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自溶现象。 3 切取组织，刀要锋利，动作要轻，不可来回切割，也不要挤压或牵拉组织，以免组织变形或内部细胞结构受损伤而发生变化。 4 切取的组织块必须小而薄。 组织块的大小一般为0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或1.5×1.5×0.3~0.5cm，最厚不能超过0.5cm。 另：柔嫩组织、被膜厚而坚实的器官、小动物的器官及组织 5 采取消化道组织时应保持清洁。 6 防止材料因固定剂的作用而发生变形。 如：柔嫩、薄的材料，有空气的组织 7、组织块附加标记的方法 采取的不同组织块，必须根据切片的要求和需要分瓶放入进行固定，加标签以示区别，并注明固定液、名称、来源、日期等等。 二、固 定 固定就是将采取的新鲜组织，放入固定液内，借助化学药品的作用使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成份沉淀保存下来。同时，使组织硬化不变形，有利于固定以后的处理。 固定时间 应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。 如：一般组织，以10％福尔马林固定24h左右，波音(Bouin)氏固定液12至24h，卡诺氏(Carnoy)固定液1h内。 适当地增加温度可缩短固定时间。 固定液的用量 应充足，一般为组织块体积的10倍左右。 3 常用固定液 （1） 单纯固定液 福尔马林固定液： 甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 优点：透渗能力强，固定均匀，组织收缩小。 缺点：但经乙醇脱水后收缩较大。 酒精固定液： 无水乙醇（纯酒精）85ml（或95ml） 蒸馏水 15ml（或5ml） 除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、丙酮等单纯固定液。 优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入85％－95％酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效果好。 缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用85％酒精固定数小时再放入95％酒精继续固定。 （２）混合固定液 波音(Bouin)氏固定液： 饱和苦味酸水溶液 75ml 甲醛 75ml 冰醋酸 5ml 渗透迅速，固定均匀，组织收缩小，切片着色良好。 卡诺氏(Carnoy)固定液： 无水乙醇 60ml 三氯甲烷（氯仿） 30ml 冰醋酸 10ml 固定速度快 ，可固定细胞浆和细胞核，尤其适宜染色体的固定. 中性福尔马林固定液 甲醛 100ml 蒸馏水 900ml 磷酸二氢钠 4g 磷酸氢二钠 6.5g 渗透性好，组织收缩小，固定效果好。 此外，还有辛克(Zenker)氏液、酒精福尔马林液(A·F·)等混合固定液 。 三、 洗 涤（或水洗） 目的：组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。 原则： 1、固定液为酒精或酒精混合液，一般不冲洗。 2、固定液为甲醛水溶液或以水配制的可用流水冲洗。 3、冲洗的时间与组织的种类，组织块大小和固定时间长短有关。 一般10-24h。 方法：流水缓慢冲洗。小组织可不冲洗，多次换水浸泡即可。 四 脱 水 组织经固定和水洗后含