高效液相色谱串联质谱法测定青蒿素在大鼠体内药物动力学研究.ppt

自从1880法国军医 Laveran发现疟疾病原虫以来，疟疾一直是人类一种高发的传染病。 SXZL * 高效液相色谱串联质谱法测定青蒿素在大鼠体内药物动力学研究 报告人: 严虹霞 单 位: 山西省肿瘤医院 课题背景 课题背景 1949年氯胍类药物发生抗药性 1957年氯喹出现了抗药性 甲氟喹在上市5年后出现抗药性 1910年奎宁在巴西出现抗药性 耐药性 快速产生 青　蒿 结　构 课题背景 青蒿素（artemisinin ART） 该类药物的不足是愈后复发率较高，为提高该类药物的疗效、降低复发率、防止耐药性的产生，WHO倡议其临床应用以联合用药为主。 　蒿甲醚－苯芴醇复方 　双氢青蒿素－哌喹复方 课题背景 课题背景 以揭示青蒿素类抗疟药的时间依赖性动力学特征为目的，采用液相色谱串联质谱技术，对青蒿素单剂量及连续5天口服给药后大鼠体内药物动力学进行了研究，为本课题后期研究青蒿素类抗疟药的代谢机理、代谢产物及合并用药相互作用的分析等奠定了基础。 研究内容 2 研究ART的体内药物动力学特征 1 1 建立生物样品中ART的分析方法 动力学 特征 单剂量 连续给药 实验整体框架 大 鼠 分析方法 青蒿素 抗疟药 建立生物样品中ART的分析方法 药 品 产地 级别 名称 昆明制药厂提供 纯度99.0% 蒿甲醚 昆明制药厂提供 纯度99.0% 青蒿素 仪 器 美国AB公司API 4000型液相色谱串联质谱联用仪，配有ESI（电喷雾离子化）源和Analyst 1.3数据处理系统； 美国Agilent 1100高效液相色谱系统（包括G1313A自动进样器，真空脱气系统，G1312A二元泵）； Luna ODS C18柱和SecurityGuard C18柱（Phenomenex，Torrance，CA，美国） 建立生物样品中ART的分析方法 检测条件 流动相：乙腈∶10mmol·l-1醋酸胺溶液（含0.1%甲酸，v/v）= 85∶15； 柱 温：20℃；流 速：0.8 ml·min-1 源电压：5.5 Kv； 检测方式：正离子检测； 碰撞气压力：3 psi； 喷雾压力：50 psi； 加热毛细管温度：600℃（ART）； 扫描方式：多反应监测方式；所用气体均为氮气。 建立生物样品中ART的分析方法 混合 离心 吹干 分析 大鼠血浆100 μl 乙腈100 μl 内标50 μl 磷酸盐缓冲液200 μl 乙醚3 ml 振荡10 min 3000 g离心10 min 分离有机相40℃氮气流下吹干 残留物加入100 μl流动相溶解，旋涡1 min，取10 μl样品进行分析 血浆样品预处理 建立生物样品中ART的分析方法 青蒿素在大鼠血浆中分析方法的建立 方法的选择性 在选定的色谱和质谱条件下，待测物及内标物都达到了良好的分离效果，同时血浆中的内源性物质不干扰青蒿素的测定。 建立生物样品中ART的分析方法 Time (min) II Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps Time (min) Time (min) Time (min) Time (min) Time (min) I I I II II Representative MRM chromatograms of (A) a blank rat plasma sample; (B) a blank rat plasma sample spiked with ART (1.0 ng·ml-1) and IS (AMT, 100.0 ng·ml-1); and (C) a rat plasma sample at 1 h after an oral dose of ART (40 mg·kg-1) to rats. I: ART; II: IS A C B 标准曲线与线性范围 样品：一系列青蒿素溶液（1.0～200.0 ng·ml-1 ） Standard curve for the determination of artemisinin in rat plasma R = 1.785 ? 10?3 + 1.430 ? 10?2C, r = 0.9978 建立生物样品中ART的分析方法 液相色