液相色谱柱的日常维护.ppt

液相色谱柱部分 I. 常见问题 基线噪音 基线漂移 鬼 峰 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 宽 峰 柱外体积效应的影响 I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 - 样品在流动相中不溶 - 样品组分与固定相不兼容 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 良好的柱使用规范 预柱与保护柱 Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) 带Techtron保护柱的 Zorbax 卡套柱 制备样品: 流动相 在安装柱前后测试压力差 如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，监测压力变化 若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA / 80% 乙腈, 6M 盐酸胍, THF, HFIP 若仍无效，应考虑更换过滤片 Column Inlet Frit 由于键合相的水解或硅胶的溶解而造成的色谱柱填料的变化是不可逆的 由于污染而产生的色谱柱变化可以通过适当的清洗使之修复 梯度洗脱的方式 (水 - 强有机溶剂) 通常最有效 低 pH 流动相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的 升高温度（60-80℃） The opposite to tailing peaks are fronting peaks with a symmetry value of less than 0.9. Fronting can happen when a column is overloaded and the column capacity is exceeded. Think of a wave washing to shore. Waves are fairly gaussian or tail slightly when they start. As they build and become larger, they push the water in front of them and break in a fronting pattern. The same thing happens on a column with too much compound. Reduce the sample injection size or dilute the sample by 10 or 100. Fronting can also indicate a small peak eluting too close to a larger peak. Diode array is useful in determining if this is the case. The last peak shape problem we will cover today, is negative peaks. This is when the peak goes down below the baseline background absorbance. This means that the adsorbance of this peak is less than the mobile phase absorbance. This occurs sometimes at the void as an equilibrium disturbance when the sample solvent passes through the column. By dissolving the sample in the mobile phase, this