BVDV E-rns-基因的真核表达与E2基因真核表达载体的构建.pdfVIP

摘要 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(Bovineviraldiarrhea．mucosaldisease virus，BVDV)是 黄病毒科瘟病毒属(Flaviridae pestivirus)的成员。主要引起牛病毒性腹泻．黏膜病 (BVD．MD)，症状为腹泻，急、慢性黏膜病，持续性感染与免疫耐受，免缦抑制；母 卣流产、步匕胎和畸形态等症状。该病主要感染牛，犊牛更易感，也可以感染其他的动物。 牛病毒性腹泻病是1廿界范围的传染性疾病，具有较高的感染率，该病在我国-二十几个省 份存在，且有扩人趋势。 E“和E2基因位于BVDV基阗组5’端的二分之一部分，分别编码具有抗原性的囊 膜蛋向E”和E2。两种蛋白诱导易感动物产生的中和抗体均能抵抗BVDV和CSFV感 染。所以利}{jE”、E2蛋白作为诊断试荆贝有重要价值。 I、朋删III双酶切后，近接至杆 本实验将实验室已有的质粒pMDl8-T-E2经BamH 重组技术将E2基闪迎接至毕赤酵母转移载体pPIC9K上，构建成重组质粒pPIC9K．E2。 同样方法对实验室已有的BVDV E“的PCR产物克隆至pMDl8-T载体上，对其鉴 定后，将E“基冈连接至杆状病毒转移载体pBlueBaeHis2A上，构建成重组表达载体 Bag．N．Blue共同转染Sf9昆虫细胞中。 pBlueBacHis2A—E”。将其与线性化杆状病毒DNA 产物的结果表明：E“基因在杆状病毒表达系统中获得表达，表达产物人小约为30kDa， 且贝有良蚶的抗原性。 Not I看l I双酶切后，E“基冈弧克隆至表 将重组质粒pBlueBagHis2A．E“经EcoR 经SalI线形化后，电转化整合到毕赤酵母GSll5基因组上。阳性转化子命名为 BVDVE“融合蛋白在毕赤酵母表达系统中获得表达。经SDS—PAGE分析，表达蛋向的 分子草人小为37kDa左右。 本实验结果表明E“基因在比虫杆状病毒表达系统中充分表达，且具有良蚶的抗原 性。这为进一步的诊断试剂盒的研制和弧单侍疫苗的制备奠定了基础，同时也为研究E” 蛋白生物功能提供材料。 关键词： 牛病毒性腹泻；E…基冈：E2基闪；杆状病毒表达系统；毕赤酵母表达 ofBVDVEm8 Eukaryotic Gene Expresstion andConstructionof EukaryticExpression VectorofE2Gene Abstract viraI themember Bovinediarrhea—mucosaIdiseasevirus(BVDV)isofthe pestivimsgenus． causedbovinevimldiarrhea-mucosaldisease．Bovinejnfected familyFlaviviridea,mainly by mucosal BVDVshowed andchronic jnfectionand diarrhea,aeut