怎样用好高效液相色谱--王建华.ppt

王建华 流路中形成气泡引起的问题 改变保留时间和峰面积 流动相中形成气泡对液流的不良影响 泵中形成气泡使液流波动 峰变形 柱中气泡形成和累积使流动相绕流 尖峰或锯齿状噪声 检测池中气泡形成和累积产生基线噪声 1-低压计量泵; 1A,1B-时间比例电磁阀; 2-微处理机; 3-混合器; 4-高压输液泵; 5-至色谱柱 恒流泵中气泡的排除 打开放空阀，按仪器前面板的“冲洗”功能键，用大流量溶剂冲洗系统直到流出的液体连续，证明气泡已经排除； 如果用”冲洗”状态仍不能吸液，可以用吸耳球或注射器在排液口抽吸，直至液体流出； 如果仍然无液体流出，可能是阀球阀座粘连，取出单向阀，向单向阀两端分别吹气，一通一堵为正常，两端均堵说明阀球座粘连，需清洗阀球阀座。 输液泵发生故障及相应排除措施 故障 可能原因 解决办法 手动进样法 一般的方法 1.在进样状态下清洗针口 2.在装填状态下插入微量注射器 3.注入样品 4.切到进样状态 便捷的方法（不需清洗） 1.进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态 3.注入样品 4.切回到进样状态 高效液相色谱检测器 检测器的保养 紫外灯的保养：分析前，柱平衡差不多时，打开检测器；在分析完闭后，先关紫外灯。（频繁的开关灯会缩短灯的使用寿命） 样品池要保养 1）用HPLC级溶剂 2）过滤流动相和溶剂 3）脱气 4）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中 HPLC的日常操作条件 最好是恒温、恒湿 温度：15—30℃ 相对湿度80% 房间应有良好的通风 空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器 避免光线直射 远离高电干扰、高振动设备 解决问题 漏液的主要原因： 1. 色谱柱未拧紧，多数发生再更换柱后。这时柱温箱会显示Leak。注意，柱温箱的漏液 传感器在两加热块之间的中间位置。请用吸水纸确认，因为有时单用眼观察不易察觉。 2. 连接管路两端未拧紧，或连接管路断裂。 3. 进样阀漏液，如自动进样器转子垫圈磨损造成漏液。 4. 泵漏液，开泵后将手伸入泵底部，可感到漏液。 5. 冷凝水的形成，如果使用柱温箱的降温功能，可能会有冷凝水生成从而使柱温箱显 示漏液。这种情况下可取消柱温箱的检漏功能(在工作站中的instrument 菜单下选择 more column thermostat 然后选择取消柱温箱的检漏功能). 6. 流动池漏液。 解决问题 系统压力过高。 1 首先拧开排液阀，以纯水作流动相并设流速为5ml/min若压力超过 10bar，应先更换排液阀的虑芯。 2 若排液阀的虑芯没有堵塞，卸下色谱柱，然后用一两通代替色谱柱 ，以水作流动相设流速为1ml/min。通常压力不会超过20bar,否则 系统可能有堵塞。 3 若上述的压力超过20bar,我们可按照从后到前的原则，也就是说先 卸下进流动池的连接管接头，开泵后，若压力正常则流动池堵塞 若仍不正常可将这段管另一端也卸下，开泵后再观察压力情况。 同样道理，我们就可以找到堵塞的地方。 容易堵塞的地方：流动池入口管；自动进样器的针及针座；柱温箱 解决问题 系统压力过低，不稳定或没液流。 1 首先拧开排液阀，设流速1~2ml/min后开泵，观察有无液流，若 有再仔细观察液流是否有倒吸现象如不能确定可用量筒测量流 速的准确性。 2 如上述无液流，或流速不准多数为主动阀阀芯或主动阀故障， 或泵有严重漏液。 3 怎样是大致判断主动阀抑或其阀芯故障？可用以下方法：当泵 运转时用手指轻捏主动主体，正常的主动阀能感到有节奏的脉 动，如果没有， 主动阀有问题。如果有则可以将主动阀阀芯取 出进行超声波清洗，如仍有问题，可更换阀芯。注意，千万不 要把整个主动阀放入超声波清洗这样会损坏主动阀。 4 若上述流速准确但拧紧排液阀后压力不稳定，请仔细检查有无 漏液。(通常漏液地方：各接口包括色谱柱，泵，进样阀等) 解决问题 峰面积重现性不好。 1. 首先观察压力是否稳定，以及观察峰面积变化是否有规律。 若压力不稳定，请检查造成压力不稳定的因素，如：漏液，排液时间不足够，盐浓度过 高导致盐析，主动阀比例阀内漏，等。 2. 若压力稳定但峰面积呈无规律变化，请检查样品是否足够，确认样品的稳定性，必要时 重新配制。检查进样阀是否漏液。等。 3. 若压力稳定且峰面积呈规律变化，多数为色谱柱未平衡好。 THE END 谢 谢 当反相或离子对HPLC无效时的第二个较好选择；首选为不溶于水/有机混合液的亲脂样品，异构体混合物和制备HPLC 硅胶最好