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后发性白内障基因治疗 　　[摘要] 现代白内障手术后由于晶状体上皮细胞大量增生等原因而常常形成后发性白内障，目前尚无有效安全的药物来防止其发生。激光后囊切开术虽常被用来提高后发障患者的视力，但可能带来视网膜脱离、黄斑水肿、眼压升高等严重并发症。基因治疗为疾病的治疗开辟了一条新途径，在基因治疗中，逆转录病毒载体是在具有分裂功能的细胞中进行基因转移和表达的载体，这一特点对其应用于靶向性治疗的实验研究有着十分重要的意义，因在后发性白内障早期，晶状体上皮细胞处于活跃分裂状态，而角膜内皮细胞等眼组织细胞多处于细胞周期的静止期。本文针对后发性白内障的基因治疗做一综述。 　　[关键词] 后发性白内障 基因治疗 自杀基因 旁观者效应 　　 　　1 后发性白内障传统的治疗方法 　　 　　自从白内障现代囊外摘除术 (ECCE)开展以来，囊内摘除术所带来的许多并发症得以避免，但也带来了一个新的问题---后发性白内障。后发性白内障系指白内障囊外摘除术后或晶状体外伤后，晶状体皮质未能完全吸收，所遗留的部分继发混浊，又称继发性白内障或后囊混浊，是白内障囊外摘除术后的一个常见并发症，也是影响术后视力提高的最主要原因。对后发性白内障的发生机制已有很多研究，术后残留的晶状体上皮细胞的增殖和迁移可能是形成后发性白内障的主要原因[1]。长期以来，后发性白内障的治疗手段主要是Nd：YAG激光后囊切开术，但Nd：YAG激光后囊切开术可合并有一些威胁视力的并发症，如眼压升高、葡萄膜炎、黄斑囊样水肿、视网膜脱离等[2]。为寻找有效防治后发障的药物，国内外学者已进行了大量研究。Power等[3]提出，眼内应用防治后发障的药物需具备以下几点：(1)有效地抑制晶状体上皮细胞的增殖和迁移；(2)对眼内其它组织无毒性作用；(3)药物需适合注入前房，其有效药物浓度能够维持足够长的时间。虽然许多药物在动物实验中都可有效抑制LEC增殖，但仅通过术中灌注囊袋和结膜下注射等给药方式，药物随房水排出快，有效浓度维持时间短暂，且对眼内其他组织产生毒性，引起了明显的炎症反应、角膜和视网膜损害[4]。这些都限制它们应用于临床。 　　 　　2 后发性白内障的基因治疗 　　 　　基因治疗与传统的治疗方法有着根本的不同，基因治疗从广义上说是将新的遗传物质转移至某个体的细胞使其获得治疗效果。具体是将不同生物的基因(亦称DNA分子)在体外进行人工“剪切”、“组合”和“拼接”，使遗传物质重新构建，然后通过载体转入受体细胞进行无性繁殖，并使所需要的基因在受体细胞内表达，产生所需要的产物。 　　（1）基因治疗的载体选择：在基因治疗中，病毒载体系统由于 　　其转染效率高而在近年来的实验研究中得到较为广泛的应用，病毒载体系统包括逆转录病毒载体(RV)、腺病毒载体 (AV)、腺相关病毒载体(AAV)、单纯疱疹病毒载体 (HSV)、痘苗病毒载体等。其中AV、AAV、HSV已被证实可以成功地将外源基因转染于眼的终末分化组织，这些载体及转染技术适合用于视网膜色素变性等遗传性眼病的治疗[5]。与此相对，逆转录病毒载体是在具有分裂功能的细胞中进行基因转移和表达的载体，这一特点对其应用于眼科增殖性疾病如后发性白内障治疗的实验研究有着十分重要的意义，因为逆转录病毒载体可能对角膜内皮细胞、视网膜组织细胞等无影响，而仅对晶状体上皮细胞等增殖细胞发生转染。 　　（2）自杀基因的运用：自杀基因疗法又称基因导向性酶前体药物疗法 (gene―directed enzyme prodrug therapy，GDEPT)，是指一些病毒或细菌的前药转换酶基因在靶细胞内编码特殊的酶，将原先对哺乳动物细胞无毒的前药在细胞中代谢为毒性产物，从而引起靶细胞自杀，而未转入自杀基因的正常组织可免受损伤。 　　目前已发现和克隆的自杀基因包括单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus―thymidine kinase， HSV―TK)基因、水痘带状疱疹病毒胸苷激酶(vari―cella-zoster virus-thymidine kinase，VZV―TK)基因、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(escherichia coli cytosin deaminase，EC―CD)基因、大肠杆菌脱氧胸苷激酶(DCK)基因、大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(GPT)基因及细胞色素p450基因。HSV―TK基因／GCV系统是目前自杀基因治疗中研究最多应用最广的体系，许多学者用逆转录病毒载体介导HSV―TK基因联合GCV，在肿瘤治疗方面取得了较好的研究结果。单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidinekinase，HSV―TK)基因的表达产物胸苷激酶不仅能催化脱氧胸苷成为脱氧胸苷酸，而且能对哺乳动物