新--药用兰科植物石斛重大病害拮抗真菌的筛选及抑菌机理.doc

药用石斛重大病害拮抗真菌的筛选及抑菌机理 Filtering of the Antagonistic fungi for major diseases of Medicinal and the studying of Antibacterial mechanism 生物技术（非师范）专业 丁春燕 指导老师 王慧中 摘要：为探讨拮抗真菌对病原菌的抑菌作用，我们从以分离得到的药用石斛内生真菌中筛选出对尖孢镰刀菌有拮抗作用的木霉菌。对其进行平板对峙培养，从而研究其拮抗作用和抑菌机理，研究结果为生物防治的应用提供实践基础。 Abstract: To investigate the antagonistic fungi on pathogen inhibition, we isolated from the medicinal Dendrobium by endophytic fungi were screened on the Fusarium fungus Trichoderma has antagonistic effects. We had done pairing culture, and to study its antagonistic effects and antibacterial mechanism. And the results can provide practical basis of the applications of biological control . 关键词：石斛； 尖孢镰刀菌( Fusarium oxysporum)； 木霉菌（Trichoderma sp）；拮抗菌； 生物防治 Key words: Dendrobium; Fusarium oxysporum; Trichoderma sp; Antagonistic bacteria; Biological Control 引言 石斛又名石斛兰，为兰科（Orchidaceae）石斛属（Dendrobium）多年生附生草本植物，全球约有1500种，主要分布于亚洲的热带和太平洋岛屿，既是观赏植物，又是十分重要的药用植物，我国有76种，其中作药用的约有40种，具有益胃生津、滋阴清热、明目健体、抗癌和增强免疫力等多种功效。 植物内生菌作为生活在植物组织内部的一大类微生物，在其生活史的一定阶段或全过程中对宿主植物不表现出病症，由于生活环境的特殊性，在生理生物学作用上与外界环境微生物都有所不同。在与植物长期共同进化过程中，植物内生菌与宿主之间形成了一种共生关系，外界环境条件与宿主植物代谢变化影响着植物内生菌的种类及其代谢发生的相应变化。植物内生菌作为一类特有的微生物资源已得到广泛的认同。其中植物抗菌内生菌能产生多种新的抗菌活性物质，不但可以帮助人类解决健康问题，也可以解决植物和动物健康问题。但现阶段对植物抗菌内生菌的研究刚刚开始，对其特性了解还不够深入，无法对其充分利用。因此，对植物抗菌内生菌的研究不仅能带来巨大的社会效益还具有现实的理论意义。 如今生物防治出现，生物防治就是利用生物及其代谢产物防治植物病原体、害虫和杂草的方法。它是一门研究利用天敌控的实质就是利用生物种间关系、种内关系，调节有害生物种群密度，即是生物群治生物群。其中重要的一点是： 植物病原菌的生物防治，即利用微生物或其代谢产物（抗生物质等）防治植物病原菌（包括土壤中的病原菌）。 本实验主要从杭州市生物化学与分子生物学重点实验室分离得到的菌种中筛选到尖孢镰刀菌菌株和木霉菌菌株，进行了种属鉴定，对木霉菌的抗真菌作用及抑菌机理进行了初步研究。 TOC \o 1-3 \h \z \u 错误！未找到目录项。(4)收集上清液，加入2μl RNase(10mg/mL)，37℃水浴保温30min。 (5)加入等体积氯仿，轻摇5min，12000r/min离心10min。 (6)吸取上清液，用2倍体积的无水乙醇，沉淀DNA，-20℃短暂放置后，12000r/min离心5min，弃上清 (7)用70%的乙醇洗涤沉淀DNA 2次，自然风干后溶于适量TE，贮存于-20℃ 1.2.1.3 DNA的检测 DNA样品在1%的琼脂糖凝胶上进行电泳，加入3μl DNA样品以MarkⅢ－MD103作为分子标记，100V电压下电泳30min，溴化乙啶染色，紫外灯下观察拍照。 1.2.1.4菌株rDNA ITS区段的PCR扩增 石斛属菌根真菌rDNA ITS区段PCR扩增引物： P1: 5 TCCGTAGGTGAACCTGCGG3 P2: 5 TCCTCCGCTTATTGATATGC3 在200μl的Ep管中依次加入26μl: 表1.PCR反应体系 组分 体积 1