猪生长轴发育规律-课件.ppt

华南农业大学动物科学学院 广州 510642 傅伟龙 研究工作进展 1) 蓝塘仔猪生长与相关激素、受体及基因表达 2) 谷胱甘肽（GSH）对断奶蓝塘仔猪、大白猪生长的调节 3) 甘氨酰谷氨酰胺对断奶大白,长白仔猪生长的调节 4) 赖氨酸螯合铜对断奶大白猪生长的调节 材料和方法 1) , 动物 蓝塘猪,大白猪和长白猪 2), 方法 饲养试验,离体细胞培养,分子生物学等实验方法 蓝塘猪品种特点 蓝塘猪为广东省地方猪种，头部及背部为黑色，四肢及腹部为白色；头型大小适中，体躯宽深短圆，背腰微凹，腹大；具有早熟易肥、肉质优美、耐粗饲、适应性强、遗传性稳定、杂交优势明显等特点。 研究基地 ——广东省板岭原种猪场 猪场位于广东省东莞市， 1993年被农业部定为第一批国家级重点猪场；该场现有大白、长白，以及广东省地方良种猪——蓝塘猪 试验猪群 1 蓝塘仔猪生长与相关激素、受体及基因表达 材料与方法 对32头不同日龄（0d、3d、21d、35d）蓝塘仔猪称重、剖杀,分别取样 用RIA法测定血液及组织液中IGF-1、FT3、FT4、Leptin、IL-2、IL-6、皮质醇水平 用放射受体分析法检测肌肉、肝脏细胞膜GHR特异结合活性 用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测肝脏和肌肉组织中IGF-1mRNA、GHRmRNA表达水平 材料与方法—激素含量测定 血液中激素含量的测定 用放射免疫分析法 ( RIA ) 组织中激素含量的测定 制备组织匀浆液 测定组织液中蛋白质含量 用放射免疫分析法测定组织液中激素含量 结果表示为每毫克蛋白质所含激素的量 放射受体分析法(RBA) 原理：采用过量的（相对受体的位点数而言）125I标记的人生长激素与细胞膜受体制剂在特定条件下反应得出总结合量（TB）；采用过量的非标记的人生长激素与125I标记的人生长激素在同样条件下反应竞争结合细胞膜制剂，得出非特异性结合量（NSB）。总结合减去非特异性结合即为特异性结合量（B） 材料与方法—受体结合活性测定 肝脏、肌肉细胞膜GHR结合活性的测定 制备膜蛋白 1.5g组织→加入3mL冰冻的匀浆缓冲液匀浆→转移匀浆液至50mL塑料离心管→冰浴状态下超声波匀浆2min→4℃1000g离心10min→取上清液在4℃，10,000g离心60min→取上清液4℃，100,000g再离心30min→最终的沉淀颗粒用1mL稀释缓冲液重悬→测膜蛋白含量→-20℃保存待用。 用放射受体分析法测定肝脏、肌肉细胞膜GHR结合活性 测定GHR简表 图3-1 组织总RNA凝胶电泳图 图3-3 IGF-ⅠcDNA的PCR产物测序结果同源性对比图 167tcaacaagcc cacagggtac ggctccagca gtcggagggc gccacagacg caggggtt ggctccagca gtcggagggc gccacagacg ? 211 ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga ggcatcgtgg atgagtgctg cttccggagc tgtgatctga ggaggctgga ? 261 gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg gatgtactgt gcacccctca agcctgccaa gtcggcccgc tccgtccgtg ? 311 cccagcgcca cacggacatg cccaaggctc agaaggaagt acatttgaag cccagcgcca cacggacatg ccaaagggtc agaaga 图3-4 IGF-ⅠcDNA的PCR产物正向、反向测序图谱 图3-6 GHR cDNA的PCR产物的凝胶电泳图注: M为DNA marker；N为阴性对照组；A、 B 、E为肝脏样品；C 、 D为肌肉样品 图3-7 GHR cDNA的PCR产物核苷酸测序结果同源性对比图 1781 ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtctcca ctgagatgcc tgtcccagac tatacctcca ttcatatagt acagtccca? 1831 cagggcctcg tactgaatgc cacagccctg cccttgcctg acaaagagtt cagggcc