摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆及活性.doc

摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素重组蛋白活性的初步鉴定 朱晓艳，胡福全，谭银玲* [摘要] 目的 初步鉴定摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因重组蛋白的生物学活性。 方法 提取，function of the bacteriophage MmP1 against Morganella morganii. Methods The peptidoglycan substrate of Morganella morganii purification was obtained by boiling Morganella morganii cells in SDS(4%,w/v).Enzymatic acivity was detected by zymography assay and gel diffusion assay respectively; The inhibition activity assay of recombinant protein was applied exogenously to the cultures of S. aureaus, P. aeruginosa and Morganella morganii, respectively; detect the synergistic effect of MmP1 endolysin and antibiotics was investigated by determination of MIC. Results The results of enzymatic assay show both recombinant protein and hen egg white lysozyme can cause the lysis of the Morganella morganii peptidoglycan. The results of gel diffusion assay show that both of recombinant protein and hen egg white lysozyme have the degradation activity to the peptidoglycan substrate. The result indicated that MmP1 endolysin could notably enhance the bacteriostasis activity of antibiotics against S. aureaus. [Key words] Endolysin; Morganella morganii; bacteriophage;antibacterial activity; bacteriostasis cativity; peptidoglycan. 摩氏摩根菌是革兰阴性菌，属肠杆菌科，存在于环境中以及人类、爬行动物和哺乳动物的肠道内。endolysin）的一种酶蛋白，其作用的底物是细菌细胞壁肽聚糖层；噬菌体感染宿主菌后，通过合成大量的内溶素瞬时裂解宿主菌细胞壁肽聚糖层，从而释放子代噬菌体[1-2]。无论革兰阴性或者阳性菌的细胞壁都含有肽聚糖结构，因此近年来利用噬菌体内溶素进行抗细菌性感染治疗的研究越来越多。 作者单位：成都军区总医院中心实验室 作者简介：朱晓艳，女，四川达县市人，硕士，从事医学微生物学方面的研究Tel：028E-mail：icicle666@ 基金项目：国家自然科学基金资助 通信作者：谭银玲，第三军医大学基础部微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室， 重庆400038；Tel：023E-mail：tanyinling2002@ 在前期工作中我们完成了对摩氏摩根菌噬菌体MmP1全基因组测序（GenBank登录No. EU652770)，并成功克隆表达了其基因组ORF12编码的内溶素重组蛋白，本实验提取，胰蛋白胨酵母粉英国Oxoid琼脂成都天泰NaCl购自重庆化学试剂厂 蛋白质电泳仪购自美国Bio—Rad公司；超净工作台37℃恒温CO2孵箱美国THERMO FORMA公司μl待检测蛋白样品（10mg/ml），放入湿盒中密闭，37℃条件下培育16h；加入亚甲基兰染色液染色2h,最后用双蒸水脱色至透明条带出现。 1.6纸片法检测重组蛋白对细菌的生长抑制活性 分别取对数生长期的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、摩氏摩根菌各