禽蛋中加丽红素加丽黄素的测定高效液相色谱法.doc

国家标准《水稻中转基因成分测定 膜芯片法》 Detection of Genetically Modified Components in Rice Membrane-based Gene-chip Method 编制说明 国家标准起草组 二〇一五年一月 国家标准《水稻中转基因成分测定－膜芯片法》编制说明 1.概况： 1.1任务来源： 本国家标准的制定是根据《国家标准委关于下达2014年第一批国家标准制修订计划的通知》（国标委综合[2014]67号）的通知，项目计划编号T-424”,计划执行完成期为2015年。标准起草工作组在前期研究、试点验证、修改完善等工作基础上，完成该项标准的研制工作。 1.2标准起草单位和标准主要起草人： 本标准由四川华汉三创生物科技有限公司、中国标准化研究院共同起草。 1.3工作概况： 在转基因成分的测定中，已制定一系列国家标准： GB/T 19495.1-2004 转基因产品检测 通用要求和定义 GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测 实验室技术要求 GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 GB/T 19495.4-2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法 GB/T 19495.5-2004 转基因产品检测 核酸定量PCR检测方法 GB/T 19495.6-2004 转基因产品检测 基因芯片检测方法 GB/T 19495.7-2004 转基因产品检测 抽样和制样方法 GB/T 19495.8-2004 转基因产品检测 蛋白质检测方法 这些标准包括：转基因检测通用定义、通用要求、实验室技术要求、抽样、制样、核酸提取、核酸定性PCR检测、核酸定量PCR检测、基因芯片检测和蛋白检测。 基于核酸的检测方法和基于蛋白的检测方法是目前检测转基因的两种主要方法。传统的转基因检测技术（PCR技术、ELISA检测技术）和早期的转基因生物芯片检测方法都很难满足批量大、高效快速的检验要求，且存在易污染、假阳性高、成本高的缺点。相对于现行标准中公布的检测技术，膜芯片方法可以在进行多指标并行检测的同时，实现快速、灵敏、方便、廉价、准确、高通量、自动化、低假阳性和可视化的转基因成分测定。 在制定本标准时参阅了国内外样品制备技术、DNA的提取、核酸杂交及相关的国家标准、应用及测定有关的技术文献和分析方法，确定本方法的基本原理和试验技术。 2.背景及标准概况： 2.1转基因水稻概况及当前主要转基因成分测定方法： 水稻是我国的主粮农作物，每年消费量近两亿吨。随着转基因技术在农业产业中的应用，多种抗虫基因（Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1Ab/Ac等）和抗除草剂基因（BAR等）被用于转基因水稻的研发。1998年，我国育成了首例转基因抗虫水稻，之后多个转基因水稻品系相继被研发出来。根据国内及国际的转基因农作物发展态势，我国未来一段时间内很可能大规模推广转基因水稻。转基因水稻产品很可能在未来全球市场中大量涌现。目前转基因产品的潜在风险仍无法定论，多个国家制定了自己的法律法规对转基因产品进行监管。我国建立了转基因标记管理制度，并于2004年发布相应的转基因检测国家标准，但这时期基于PCR技术、ELISA等技术的标准都建立在检测少数转基因产品的基础上，对近期产业化的转基因植物很难鉴别，尤其针对具有多种外源转基因片段的转基因水稻，更无便捷有效的检测方法。 传统转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫试纸条和Western杂交等方法是目前主要的基于蛋白的检测方法，其共同特点是需要通过一定的处理步骤从样品中释放出目标蛋白（抗原），然后利用抗体特异性的结合抗原蛋白，最后通过酶标或金属标偶联抗体与抗原抗体复合物结合，从而产生可检测的信号，该类方法的优点是检测速度快，缺点是检测灵敏度相对较低，并且需要制备高特异性抗体，同时检测容易受到多种因素的影响，出现假阳性。而基于核酸的检测方法是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，检测方法主要包括PCR（聚合酶链式反应）技术和基于分子杂交的基因芯片技术。目前仍以PCR技术应用最为广泛，其常用的技术方法包括普通定性PCR、巢式PCR、多重PCR、荧光定量PCR等方法。普通定性PCR方法检测效率低，尤其检测多基因对象时更加费时费力；巢式PCR可以显著的提高检测灵敏度，但步骤较繁琐，同样存在检测效率的问题；多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，实现多指标的并行检测，但常规的电泳检测结果很难判断，容易出现假阳性和假阴性结果；荧光定量PCR方法灵敏度高，但其成本高，并行检测的指标少，并且需要特殊检测仪器。基因芯片也是常用的转基因产品检测技术，目前一般采用