肖志波公示内容.doc

题目：皮肤瘢痕过度生长的分子机制及其干预策略研究 Title：Reasearch on molecular mechanism of excessive growth of skin scar and intervene strategy based on these mechanism 主题词：皮肤，肉毒素，miRNA-21，TGF-β1，瘢痕，凋亡 任务来源：黑龙江省自然科学基金（2010-D-61），中国博士后基金（2008-1047），哈尔滨医科大学杰出青年基金（2012-J-6），哈医大二院博士启动基金（2007-B-21） 二．项目简介 瘢痕是创伤修复的必然结果,没有瘢痕就不会有愈合,然而瘢痕生长如果超过一定的限度就会并发病理性瘢痕（包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩）；给患者带来功能障碍和容貌损害。尽管目前针对病理性瘢痕的基础研究很多，但取得突破性进展的报告很少。目前临床上没有任何一种方法对病理性瘢痕有根治性的把握，所以迫切需要加强病理性瘢痕发病机制研究，并以此为理论基础探索新的治疗方法满足临床需要。 以往研究证实成纤维细胞凋亡不足是病理性瘢痕的重要病因，本研究以此为切入点，着眼于病理性瘢痕成纤维细胞（PSF）凋亡的分子调控机制并使之临床转化。一方面本研究探讨PSF中TGF-β1是否通过调控miR-21而影响FasL和PTEN的表达，以及改变成纤维细胞的增殖、迁移、凋亡等特性。综合应用实时定量PCR、Western Blotting、EdU嵌入、Transwell、流式细胞仪等技术证实PSF中TGF-β1与miR-21的表达量明显高于正常皮肤成纤维细胞中的表达，且两者的表达呈正相关。转染了TGF-β1或 miR-21抑制物后，FasL和PTEN蛋白表达量与凋亡细胞数明显增加，同时细胞的增殖与迁移能力下降。上调正常皮肤成纤维细胞中TGF-β1的表达能够得到相反的结果；说明改变TGF-β1的水平能够有效的通过调控miR-21影响成纤维细胞的增殖、迁移、凋亡能力。TGF-β1与miR-21能够相互作用调节FasL和PTEN蛋白的表达，在该领域提出了新的理论基础。另一方面本研究发现A型肉毒素(botulinum toxin type A,BTXA)能够抑制细胞凋亡，且在临床上可以抑制增生性瘢痕和瘢痕疙瘩生长，但具体机制不清；为阐明BTXA抑制病理性瘢痕生长的分子机制，本研究将BTXA作用于体外培养的PSF，检测BTXA处理前后PSF细胞周期和凋亡情况；并检测BTXA处理前后PSF中TGF-?1、CTGF和VEGF等因子表达，以及Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化；从而证明BTXA能够诱导体外培养的PSF凋亡并降低TGF-?1、CTGF和VEGF等因子，以及Ⅰ、Ⅲ型胶原的蛋白表达。在体外细胞学实验的基础上，开展动物实验。建立兔儿瘢痕模型，将BTXA注射至模型动物的瘢痕组织中，在动物体内证明BTXA能抑制PSF凋亡及瘢痕组织生长。本研究从体内外实验两方面揭示了PSF凋亡的分子机制，并运用miRNA-21 和BTXA成功干预PSF凋亡水平，创新发展了病理性瘢痕的发病机制；为临床上科学地治疗病理性瘢痕提供了坚实的理论基础，具有十分重要的理论价值和潜在的临床应用价值。 本研究有较强的原始创新性,成果发表在国外权威杂志上,共发表SCI收录论文26篇, 累计影响因子65. 该研究成果对进一步揭示病理性瘢痕发病机制有着十分重要的理论意义和潜在的临床应用价值。 三．重要科学发现 1.发现PSF中TGF-β1 和miR-21呈过表达 本研究应用Q-PCR技术测定TGF-β1 和miR-21在PSF中mRNA的相对表达量。发现TGF-β1在PSF中的表达量明显高于正常皮肤成纤维细胞；miR-21的相对表达量在PSF中明显的升高。（发表在PRS，年卷期页，影响因子,SCI ,引用次数）。 2.发现TGF-β1 可诱导miR-21的表达 为证明PSF中TGF-?1是否能够调节miR-21的表达，用TGF-?1抑制物转染至PSF，发现内源性miR-21表达下调；说明了PSF中miR-21能够被TGF-?1所调节。为了进一步得到TGF-β1 和miR-21相关调节更可靠的结论，本课题组向正常皮肤成纤维细胞中转染TGF-?1质粒，发现TGF-?1质粒诱导了miR-21生成，使miR-21的表达提高了1.3倍；TGF-?1能够诱导miR-21的产生，且呈剂量依赖性。 3.证实TGF-β1 影响成纤维细胞的增殖、迁移与凋亡能力 本研究发现PSF增殖率较正常皮肤成纤维细胞明显增高；TGF-?1抑制物能够抑制PSF增殖率。此方法充分说明了TGF-?1能够促进PSF增殖，抑制成纤维细胞的凋亡；且高表达的TGF-?1能够促进成纤维细胞的迁移活性。 4. 证实TGF-β1可以调节Fas